典型文献
新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化以及晶体优化
文献摘要：
本研究通过原核表达方法,探索新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化,同时优化其蛋白晶体的生长条件,为新型冠状病毒核蛋白的结构生物研究提供基础.本研究合成N蛋白N端结构域基因序列,构建原核系统表达载体,利用大肠杆菌表达重组目的蛋白.Ni2+亲和层析和凝胶过滤层析的方法对N蛋白N端结构域重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白的纯度.本研究成功构建原核重组载体pET28b-N-N,大肠杆菌在37℃下进行扩增生长,16℃下进行诱导表达,80％目的蛋白以可溶蛋白的形式表达.Ni2+亲和纯化和凝胶过滤层析后,Quantity One软件进行蛋白胶积分分析,获得纯化后的积分占比,获得目的蛋白的纯度高达90％以上,利用Hampton的蛋白晶体试剂盒进行蛋白质晶体筛选,获得质量较高的N蛋白N端结构域蛋白质晶体.凝胶迁移试验(EMSA)验证了N蛋白N端结构域具有结合特定RNA片段的作用,明确了N蛋白N端结构域稳定新型冠状病毒基因组的功能.为进一步解析N蛋白N端结构域的三维结构以及后续抗体开发提供研究基础.
文献关键词：
SARS-CoV-2;N蛋白;纯化;晶体
中图分类号：
作者姓名：
陈铎;刘永哲
作者机构：
首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸与危重症医学科,北京 100020;首都医科大学附属北京朝阳医院感染和临床微生物科,北京 100020
文献出处：
引用格式：
[1]陈铎;刘永哲-.新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化以及晶体优化)[J].生物技术通报,2022(12):149-155
A类：
Hampton
B类：
核蛋白,结构域,表达纯化,原核表达,表达方法,同时优化,生长条件,基因序列,表达载体,大肠杆菌表达,目的蛋白,Ni2+,亲和层析,凝胶过滤层析,重组蛋白,SDS,PAGE,电泳鉴定,重组载体,pET28b,诱导表达,亲和纯化,Quantity,One,积分分析,分占,试剂盒,晶体筛选,凝胶迁移,迁移试验,EMSA,病毒基因组,三维结构,SARS,CoV
AB值：
0.367585
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