典型文献
CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及免疫原性分析
文献摘要：
旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白,并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性.本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2,转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达,收集细胞培养上清,进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化,Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性,利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔,用细胞间接免疫荧光(IFA)和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性.纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL-1;Western blot结果显示,利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带;新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平达到1∶1 024 000;IFA试验结果显示,该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达,进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性.本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础.
文献关键词：
牛病毒性腹泻病毒;E2蛋白;真核表达;CHO悬浮培养;免疫原性
中图分类号：
作者姓名：
李亚军;茹毅;郝荣增;蒋成辉;王伟;张越;张贵才;刘华南;卢炳州;杨洋;陶世宇;杨锐;宋向东;陈娇;余四九;郑海学
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室,兰州730046
文献出处：
引用格式：
[1]李亚军;茹毅;郝荣增;蒋成辉;王伟;张越;张贵才;刘华南;卢炳州;杨洋;陶世宇;杨锐;宋向东;陈娇;余四九;郑海学-.CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及免疫原性分析)[J].畜牧兽医学报,2022(12):4315-4324
A类：
NADL
B类：
CHO,牛病毒性腹泻病毒,E2,白及,免疫原性,悬浮培养,表达系统,统制,bovine,viral,diarrhea,virus,BVDV,基因序列,真核表达质粒,pcDNA3,转染,分泌表达,细胞培养,养上,上清,亲和层析,层析法,SDS,PAGE,电泳鉴定,blot,His,阳性血清,反应性,新西兰大白兔,间接免疫荧光,IFA,反应活性,BCA,试剂盒,目的蛋白,条带,血清抗体,体阳,抗体效价,MDBK,功利,亚单位疫苗,疫苗研制
AB值：
0.242638
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