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无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析
文献摘要:
为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性,根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列,对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺,同时对信号肽序列进行密码子优化,将化学合成的该序列插入到载体pET32a,获得重组质粒pET32a-αH176N,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白.SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,αH176N蛋白在乳糖1~2 g/L、28℃诱导条件下高效分泌表达.卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示,αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性.免疫保护试验结果显示,αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗,以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果,优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果.
文献关键词:
产气荚膜梭菌;α毒素;自诱导;分泌表达;免疫原性
中图分类号:
作者姓名:
魏后军;范志宇;胡波;仇汝龙;陈萌萌;宋艳华;徐为中;王芳
作者机构:
江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室,江苏南京210014
文献出处:
引用格式:
[1]魏后军;范志宇;胡波;仇汝龙;陈萌萌;宋艳华;徐为中;王芳-.无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析)[J].江苏农业科学,2022(14):166-169
A类:
H176N
B类:
无毒性,产气荚膜梭菌,重组蛋白,自诱导,分泌表达,免疫原性,毒素基因,基因序列,组氨酸,天冬酰胺,信号肽,肽序列,密码子优化,化学合成,pET32a,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,SDS,PAGE,blot,乳糖,诱导条件,卵磷脂,磷脂酶,毒力试验,氢氧化铝,免疫保护效果,灭活疫苗,疫苗免疫
AB值:
0.276324
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