典型文献
牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析
文献摘要：
[目的]扩增牛妊娠相关蛋白19(bovine pregnancy-associated glycoprotein 19,BoPAG19)基因,构建真核表达载体,并检测其在HEK-293F细胞中的表达.[方法]根据BoPAG19基因序列(GenBank登录号:NM_176628)体外合成BoPAG19基因,PCR扩增目的基因,经双酶切后与真核表达载体pcMV3连接,构建pcMV3-BoPAG19重组质粒.采用Lipofectamine?2000将重组质粒瞬时转染至HEK-293F细胞,SDS-PAGE法鉴定细胞培养上清中BoPAG19蛋白的表达,采用亲和层析法纯化BoPAG19蛋白.通过在线工具分析BoPAG19蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、B细胞抗原、二级结构、三级结构和蛋白相互作用.[结果]成功构建pcMV3-BoPAG19重组载体,目的基因长约1 200 bp,表达蛋白约60 ku.生物信息学分析显示,BoPAG19蛋白编码380个氨基酸,其中含量最高的是丝氨酸(Ser),占比9.2％,含量最低的是色氨酸(Trp),占比1.6％;分子式为C1937H3028N524O532S15,理论分子质量为41.8 ku,等电点为9.62,不稳定指数为40.75,在水中不稳定,脂肪系数为91.53,消光系数为52 370 mol-1·cm-1,具有水溶性;含有1个信号肽,无跨膜区域,有6个糖基化位点和11个B细胞表位;二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链占比分别为18.95％、6.32％、42.37％和32.37％,三级结构预测结果与二级结构一致.与BoPAG19互作的蛋白包括APLP2和APP,可能参与了妊娠期的神经调节.[结论]试验成功表达、纯化了 BoPAG19蛋白,并分析了 BoPAG19的生物信息学特征,为BoPAG19蛋白的结构和功能研究,以及BoPAG19诊断奠定基础.
文献关键词：
牛妊娠相关蛋白19(BoPAG19);真核表达;生物信息学
中图分类号：
作者姓名：
董媛;于鸿绪;陈国良;鲍东博;崔嘉芮;刘磊;王会岩
作者机构：
吉林医药学院检验学院,吉林132013;动物疫病预防控制中心,吉林136600;吉林农业大学生命科学学院,长春130700;吉林医药学院抗体工程科技协同创新中心,吉林132013
文献出处：
引用格式：
[1]董媛;于鸿绪;陈国良;鲍东博;崔嘉芮;刘磊;王会岩-.牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析)[J].中国畜牧兽医,2022(04):1233-1243
A类：
BoPAG19,pcMV3,C1937H3028N524O532S15,APLP2
B类：
妊娠相关蛋白,真核表达载体,生物信息学分析,bovine,pregnancy,associated,glycoprotein,HEK,293F,基因序列,GenBank,登录号,NM,目的基因,双酶,重组质粒,Lipofectamine,转染,SDS,PAGE,细胞培养,养上,上清,亲和层析,层析法,疏水性,信号肽,二级结构,三级结构,蛋白相互作用,重组载体,bp,ku,蛋白编码,丝氨酸,Ser,色氨酸,Trp,分子式,分子质量,等电点,消光系数,水溶性,糖基化位点,细胞表位,无规则,卷曲,结构预测,白包,妊娠期,神经调节,结构和功能,功能研究
AB值：
0.3161
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