依据F种肠道病毒(enterovirus species F,EV-F) SD-S67毒株的基因组序列设计合成引物,RT-PCR扩增出该毒株的VP1基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ位点,表达出VP1重组蛋白.以纯化VP1重组蛋白为免疫原,制备兔源多克隆抗体,并以制备的抗体建立了检测F种肠道病毒的双抗体夹心ELISA方法,同时对山东和河南省部分地区牛群感染EV-F进行了初步的流行病学调查.结果 显示,捕获抗体的最佳包被量为400 ng/孔,HRP酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶400;确定的方法判断标准为样品的D490＞0.217时判定为阳性.建立的ELISA方法可以特异性检测出EV-F病毒抗原,而EV-E和BVDV病毒抗原检测结果均为阴性,表明方法具有较好的特异性.以建立的ELISA方法检测不同稀释倍数的阳性样品,结果稀释1000倍后的样品检测结果仍为阳性,表明建立的方法具有较高的敏感性.应用建立的方法检测部分样品,组内变异系数为1.05％～9.24％,组间变异系数为1.39％～6.78％,说明该方法具有良好的重复性.同时部分样品的ELISA和PCR方法的检测结果显示,两者的符合率为100％.以该方法对山东、河南两地牛群样品进行检测,结果显示牛群的EV-F的感染率分别为12％和8％.结果 表明,建立的F种肠道病毒双抗体夹心ELISA方法具有较高的特异性、敏感性,且快速简便,可用于F种肠道病毒感染的诊断与流行病学调查.

EV-F;EV-E;双抗体夹心ELISA;流行病学调查

王浴光;常晓冉;胡俊英;刘叙;蔡梦露;章凡;胡卉琪;王新平

吉林大学动物医学学院,吉林长春130062;吉林大学教育部人兽共患病研究重点实验室,吉林长春130062

中国兽医学报

[1]王浴光;常晓冉;胡俊英;刘叙;蔡梦露;章凡;胡卉琪;王新平-.检测F种肠道病毒双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用)[J].中国兽医学报,2022(01):89-94

S67,D490

双抗,夹心,初步应用,enterovirus,species,EV,毒株,基因组序列,序列设计,设计合成,引物,VP1,原核表达载体,pGEX,4T,BamH,EcoR,重组蛋白,免疫原,兔源,多克隆抗体,牛群,流行病学调查,捕获抗体,包被,HRP,判断标准,特异性检测,BVDV,抗原检测,明方,不同稀释倍数,样品检测,分样,组内变异,组间变异,符合率,两地,感染率,速简,肠道病毒感染

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