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基于单表达质粒的T7噬菌体病毒样颗粒制备、纯化及形态鉴定
文献摘要：
目的 提供一种基于单表达质粒制备T7噬菌体病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的新策略,为后续构建基于T7噬菌体病毒样颗粒的载体疫苗或靶向药物奠定基础.方法 将T7噬菌体衣壳蛋白基因gp10A及支架蛋白基因gp9分别克隆至质粒pRSFDuet-1的MCS1及MCS2位点,转入大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导、表达及自主装,采用超高速离心及尺寸排除色谱对T7 VLPs进行纯化,利用SDS-PAGE、透射电镜和动态光散射技术,对纯化后的T7 VLPs进行形态、结构、表型及粒径分析.结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明成功构建pRSFDuet-1-gp9-gpl0A质粒,SDS-PAGE电泳表明该质粒能在大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达T7噬菌体衣壳蛋白GplOA及支架蛋白Gp9,经尺寸排除色谱纯化后的纯度较高;通过透射电镜观察其自主装形成大小均一的VLPs结构,该VLPs平均粒径为70 nm,形态似T7噬菌体原衣壳结构.结论 利用pRSFDuet-1质粒同时表达T7噬菌体衣壳蛋白GplOA和支架蛋白Gp9,能在大肠杆菌BL21(DE3)中自主装形成VLPs.
文献关键词：
T7噬菌体;病毒样颗粒;原核表达;疫苗载体;药物递送
中图分类号：
作者姓名：
杨加雪;朱娅岚;方楚斌;何流;汪川;唐田
作者机构：
四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院,四川成都610041;北京大学肿瘤医院
文献出处：
引用格式：
[1]杨加雪;朱娅岚;方楚斌;何流;汪川;唐田-.基于单表达质粒的T7噬菌体病毒样颗粒制备、纯化及形态鉴定)[J].现代预防医学,2022(13):2426-2429
A类：
gp10A,gp9,pRSFDuet,MCS1,MCS2,gpl0A,GplOA,Gp9
B类：
质粒,T7,噬菌体,病毒样颗粒,形态鉴定,Virus,like,particles,VLPs,载体疫苗,靶向药物,衣壳蛋白,别克,转入,大肠杆菌,BL21,DE3,超高速离心,SDS,PAGE,透射电镜,动态光散射,散射技术,粒径分析,琼脂糖凝胶电泳,色谱纯化,过透,电镜观察,均一,平均粒径,壳结构,原核表达,疫苗载体,药物递送
AB值：
0.223513
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