目的 构建肺炎链球菌(ATCC49619)小片段自溶素基因lytA'的原核表达载体,通过大肠埃希菌表达系统进行原核表达获得一种新型肺炎链球菌小片段自溶素重组蛋白LytA',初步探讨该蛋白的体外抗菌活性,并与青霉素G同时进行比较.方法 设计lytA基因的特异性引物,并通过PCR方法从肺炎链球菌(ATCC49619)中扩增lytA基因,并将其插入原核表达载体PGM-T中,构建PGM-T/lytA重组质粒,使用限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和HindⅢ消化PGM-T/lytA获得小片段自溶素基因lytA'.再构建表达质粒pET-32a (+)/lytA'并转化到感受态细胞大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的 蛋白,使用透析袋等电点洗脱技术纯化回收目的 蛋白LytA';采用微量肉汤稀释法分别测定LytA'和青霉素G对肺炎链球菌(ATCC49619)的最小抑菌浓度(MIC),并将其作用于青霉素G敏感菌株肺炎链球菌(ATCC49619),初步探讨小片段自溶素蛋白LytA'的体外抗菌活性.结果 成功构建重组质粒PGM-T/lytA和pET-32a(+)/lytA'.小片段自溶素重组蛋白表达良好,并显示出预期的抗菌活性.与生长对照组相比,LytA'和青霉素G在3h时显示出明显的抗菌活性(t=14.2430,P＜0.0110;t=7.4000,P＜0.0220),抑菌效应持续至7 h(t=20.8380,P＜0.0080;t=17.8890,P＜0.0170),抑菌效应逐渐增强.此外,在7h时,LytA'的抑菌活性明显强于青霉素G(t=6.7640,P＜0.0270).结论 小片段自溶素重组蛋白LytA'对青霉素G敏感肺炎链球菌显示出一定的体外抑菌活性,且持续时间久,有成为抗肺炎链球菌感染治疗药物的可能性.

肺炎链球菌;自溶素蛋白;抗菌活性

谢兴凤;罗红;蒋久怡;任艳

电子科技大学医学院附属绵阳市中心医院医学检验科,四川绵阳621000;大连医科大学临床免疫与微生物教研室,辽宁大连116044

中国热带医学

[1]谢兴凤;罗红;蒋久怡;任艳-.肺炎链球菌小片段自溶素蛋白LytA '的体外抗菌活性探讨)[J].中国热带医学,2022(02):148-152

自溶素蛋白,LytA,ATCC49619,lytA

肺炎链球菌,小片,体外抗菌活性,原核表达载体,大肠埃希菌,表达系统,青霉素,特异性引物,入原,PGM,重组质粒,限制性,核酸内切酶,BamH,Hind,再构,建表,pET,32a,感受态,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,透析袋,等电点,洗脱,微量肉汤稀释法,最小抑菌浓度,MIC,重组蛋白表达,3h,应持,7h,体外抑菌活性,抗肺炎,链球菌感染,治疗药物

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