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T-ARMS PCR多重检测方法研究
文献摘要：
目的 建立有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(T-ARMS PCR)多重检测的方法 ,实现针对肝细胞癌常见基因突变位点TP53 R249S、TP53 R273H、CTNNB1 S45F的多重检测.方法 针对3个基因突变位点进行引物设计,每个基因突变位点所设计引物序列的5'端不加一段DNA序列(Tail Free Primer)或者所设计的引物序列5'端加一段相同的DNA序列(Tailed Primer),利用实时荧光定量PCR仪分别检测并比较3个基因突变位点的不同引物序列形成的单重体系、三重体系的扩增结果 ,研究T-AMRS PCR方法 对突变型基因位点突变负荷的检测限、特异性和多靶标检测能力.结果 3个基因突变位点Tailed Primer单重体系扩增结果 显示,突变型质粒的扩增均优于野生型质粒,野生型质粒的扩增均被有效抑制,突变负荷检测限低至0.10％,特异性良好.Tailed Primer三重体系减少了引物二聚体的产生,调控CTNNB1 S45F、TP53 R249S、TP53 R273H的解链温度分别为81.11℃、82.36℃、86.35℃,实现不同突变位点的显著区分.与Taqman探针基因分型方法 相比,T-AMRS PCR方法 野生型和突变型基因的Ct值差异更显著,单荧光通道即可实现突变基因检测.结论 运用T-ARMS PCR进行一管三重检测,分析熔解曲线,能有效检测到目的 基因突变,抑制野生型模板的扩增,并区分不同的基因突变位点;同时,Tailed Primer设计减少了多重情况下引物二聚体的产生.该方法 可为临床中肝细胞癌的早期筛查、预后预测、病情监测提供理论依据.
文献关键词：
有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应;多重检测;熔解曲线分析;基因突变;肝细胞癌
中图分类号：
作者姓名：
陶明丽;李莹雪;李豪;张威;李传宇;周连群;李金泽
作者机构：
中国科学技术大学生命科学与医学部生物医学工程学院(苏州),江苏苏州 215123;中国科学院苏州生物医学工程技术研究所,江苏苏州 215163
文献出处：
引用格式：
[1]陶明丽;李莹雪;李豪;张威;李传宇;周连群;李金泽-.T-ARMS PCR多重检测方法研究)[J].国际检验医学杂志,2022(22):2689-2694
A类：
有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应,R249S,S45F,Tailed,AMRS
B类：
ARMS,多重检测,肝细胞癌,基因突变位点,TP53,R273H,CTNNB1,引物设计,不加,Free,Primer,单重,扩增结果,突变型,基因位点,位点突变,检测限,多靶标,检测能力,质粒,野生型,变负荷检测,二聚体,解链,Taqman,基因分型,分型方法,Ct,光通,突变基因检测,一管,有效检测,重情,早期筛查,预后预测,病情监测,熔解曲线分析
AB值：
0.202563
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