目的 检测前列腺癌细胞中环状核糖核酸(circular RNAs,CircRNA)100395基因启动子区甲基化状态及其表达水平,研究CircRNA-100395基因去甲基化对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制.方法 选择人正常前列腺上皮细胞(RWPE)和前列腺癌细胞系(LNCap,PC3和DU145)进行研究.采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测CircRNA-100395基因启动子区甲基化状态.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测上述细胞中CircRNA-100395 mRNA表达水平.应用去甲基药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(AZA)处理LNCap细胞,检测AZA去甲基化处理前后细胞中CircRNA-100395表达水平.采用CCK-8和Transwell实验检测CircRNA-100395基因去甲基化前后LNCap细胞增殖和侵袭能力.构建CircRNA-100395野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶报告分析CircRNA-10039与miRNA-136-5p之间的靶向关系;利用qRT-PCR检测CircRNA-10039与miRNA-136-5p表达水平,验证其调控关系.采用Westernblot法检测AZA去甲基化和miRNA-136-5p过表达对Smad3,p-Smad3蛋白表达的影响.结果 前列腺癌细胞中CircRNA-100395呈高甲基化状态;LNCap,PC3及DU145细胞中CircRNA-100395相对表达水平分别为0.39±0.08,0.65±0.14,0.62±0.10,显著低于RWPE(1.12±0.15)细胞中表达水平,差异有统计学意义(F=42.076,P<0.001).经AZA去甲基化处理后,LNCap细胞中CircRNA-100395表达水平为1.02±0.17,较未处理LNCap细胞(0.42±0.05)明显升高,差异有统计学意义(t=5.808,P<0.01).AZA去甲基化处理显著抑制了LNCap细胞的增殖能力(t=8.764～12.970,均P<0.001)、迁移能力(t=6.092,P<0.01).miRNA-136-5可能是CircRNA-100395的下游靶基因.未经AZA处理前LNCap细胞中CircRNA-100395,miRNA-136-5p表达水平分别为0.39±0.08,0.87±0.15,AZA处理后两者表达水平分别为1.02±0.17,0.35±0.08,差异有统计学意义(t=5.808,5.298,均P<0.01).AZA处理后Smad3和p-Smad3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(t=7.394,11.889,均P<0.01);miRNA-136-5p过表达抑制了Smad3和p-Smad3蛋白表达,差异有统计学意义(t=4.996,5.422,均P<0.01).结论 CircRNA-100395基因启动子区的高甲基化状态可以抑制CircRNA-100395在前列腺癌细胞中的表达水平,去甲基化处理后CircRNA-100395表达恢复,并抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与CircRNA-100395靶向调控miRNA-136-5p/Smad3轴有关.

前列腺癌;环状核糖核酸-100395;甲基化状态;miRNA-136-5p/Smad3;细胞增殖;细胞侵袭

张士保;朱斐煜;谢瑞玉;尚宪平

来安家宁医院检验科,安徽滁州 239200;滁州市第一人民医院检验科,安徽滁州 239200

现代检验医学杂志

[1]张士保;朱斐煜;谢瑞玉;尚宪平-.CircRNA-100395基因通过启动子区甲基化调控miRNA-136-5p/Smad3轴促进前列腺癌细胞增殖及侵袭的机制研究)[J].现代检验医学杂志,2022(05):44-49

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