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牛乳过敏原β-乳球蛋白分离纯化方法优化及IgG结合能力分析
文献摘要：
目的 优化分离纯化方法,获得高纯度、高得率且具有良好IgG结合能力的 β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg).方法 以超速离心脱脂、等电点沉淀、硫酸铵沉淀为前处理方法,通过Sephadex G-75凝胶柱层析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析纯化β-Lg,并对纯化条件进行优化,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对 β-Lg进行鉴定,采用蛋白质印迹法(Western blot)对其IgG结合能力进行验证.结果 凝胶层析最佳洗脱条件为0.02 mol/L pH 6.8 Tris-HCl+0.15 mol/L NaCl,流速0.4 mL/min;阴离子交换层析最佳洗脱条件为0.05 mol/L pH 6.5 Tris-HCl+0～0.5 mol/L NaCl,流速0.5 mL/min;结合SDS-PAGE与LC-MS/MS鉴定,该条件下获得的终产物为 β-Lg;该方法获得的 β-Lg得率为54.89％,纯度为100％(SDS-PAGE),且具有良好的IgG结合能力.结论 本研究建立了一种简单、可重复的β-Lg分离纯化方法,在获得高纯度β-Lg的同时保持良好的IgG结合能力,为后续牛乳过敏及脱敏研究提供技术支撑.
文献关键词：
牛乳过敏原;β-乳球蛋白;分离纯化;鉴定;IgG结合能力分析
中图分类号：
作者姓名：
杨艳;于宁;康文瀚;张九凯;孙爱东;陈颖
作者机构：
北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;中国检验检疫科学研究院,北京 100176
文献出处：
引用格式：
[1]杨艳;于宁;康文瀚;张九凯;孙爱东;陈颖-.牛乳过敏原β-乳球蛋白分离纯化方法优化及IgG结合能力分析)[J].食品安全质量检测学报,2022(19):6377-6384
A类：
B类：
牛乳过敏原,蛋白分离,分离纯化,纯化方法,方法优化,IgG,结合能,能力分析,高纯度,得率,lactoglobulin,Lg,超速离心,脱脂,等电点,硫酸铵,前处理方法,Sephadex,柱层析,DEAE,Sepharose,Fast,Flow,阴离子交换柱,层析纯化,合十,十二烷基硫酸钠,聚丙烯酰胺凝胶电泳,sodium,dodecyl,sulfate,polyacrylamide,gel,electrophoresis,SDS,PAGE,串联质谱法,liquid,chromatography,tandem,mass,spectrometry,LC,蛋白质印迹法,blot,胶层,洗脱条件,Tris,HCl+0,NaCl,阴离子交换层析,该条,终产物,可重复,保持良好,脱敏
AB值：
0.368709
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