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表面活性肽在大肠杆菌中的异源表达
文献摘要：
为构建新型表面活性肽的表达载体,并探讨其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化,将编码新型活性肽A6 K的重复DNA片段(A6 K)15分别插入到4中不同的原核表达载体中,经酶切和测序验证后,转化到3种不同的表达宿主进行表达,通过改变异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导温度和时间来优化表达条件.表达产物通过镍-次氮基三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)螯合层析进行纯化,通过(A6K)15上的6×His与抗体特异性结合进行Western blot分析,用二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测定产物浓度,进行经济效益分析.构建了含有目的基因(A6 K)15的重组表达质粒,筛选出最优载体pET-28a-SUMO-(A6K)15和最优宿主BL21(DE3).当IPTG终浓度为1.0 mmol/mL,诱导温度为30℃,时间为12 h时,表面活性肽(A6K)15的表达量最高,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel e-lectrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定含有此新型小分子多肽(A6K)15.该研究成功构建了新型表面活性肽(A6K)15表达载体,并得到其最优表达条件,使其大量表达及纯化,为生物方法制备新型表面活性肽提供了思路.
文献关键词：
表面活性肽;重组载体;融合表达;纯化
中图分类号：
作者姓名：
孟淑娟;李慧男;庞正军;慕静;王凤寰
作者机构：
北京工商大学 轻工科学技术学院,北京,100048
文献出处：
引用格式：
[1]孟淑娟;李慧男;庞正军;慕静;王凤寰-.表面活性肽在大肠杆菌中的异源表达)[J].食品与发酵工业,2022(03):30-37
A类：
表面活性肽,A6K,lectrophoresis
B类：
大肠杆菌,异源表达,达产,原核表达载体,宿主,主进,异丙基,半乳糖,糖苷,isopropyl,thiogalactoside,IPTG,温度和时间,nickel,nitrilotriacetic,acid,NTA,螯合,层析,His,抗体特异性,特异性结合,blot,喹啉,bicinchoninic,BCA,定产,经济效益分析,目的基因,重组表达,质粒,pET,28a,SUMO,BL21,DE3,十二烷基硫酸钠,聚丙烯,凝胶电泳,sodium,dodecyl,sulfate,polyacrylamide,gel,SDS,PAGE,有此,小分子多肽,生物方法,重组载体,融合表达
AB值：
0.387611
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