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基于噬菌体抗体库技术制备诺如病毒全人源单链抗体
文献摘要：
目的 基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒(norovirus,NoV)全人源单链抗体(single-chain antibody frag-ment,scFv).方法 从G Ⅱ.6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段,通过OverlapPCR技术将两者随机拼接成scFv基因片段.将scFv基因克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E,转化至感受态E.coliTG1,获得全人源scFv噬菌体抗体库.以GⅡ.6 P蛋白为固相抗原对抗体库进行4轮生物筛选,以选取的特异性抗NoV阳性噬菌体为模板,扩增scFv基因后,进行原核表达及纯化,并鉴定其特异性及中和性.结果 人源噬菌体scFv抗体库库容约为8.8×106PFU/mLo 4轮生物筛选共获得10株scFv,均能与GⅡ.4、GⅡ.6和GⅡ.17NoVP蛋白发生特异性结合,且对3株NoV毒株均有不同程度的阻断作用.结论 利用GⅡ.6 NoV感染者恢复期的PBMCs构建了全人源scFv噬菌体抗体库,筛选出的10株抗NoV scFv对NoV具有一定的中和作用.
文献关键词：
诺如病毒;噬菌体抗体库;单链抗体
中图分类号：
作者姓名：
周飞园;王璐;余京蓉;梁芷妍;林璧慧;张绪富;戴迎春
作者机构：
南方医科大学公共卫生学院流行病学系,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515
文献出处：
引用格式：
[1]周飞园;王璐;余京蓉;梁芷妍;林璧慧;张绪富;戴迎春-.基于噬菌体抗体库技术制备诺如病毒全人源单链抗体)[J].中国生物制品学杂志,2022(12):1458-1464,1476
A类：
OverlapPCR,pCANTAB,coliTG1,106PFU,mLo,17NoVP
B类：
噬菌体抗体库,诺如病毒,单链抗体,norovirus,single,chain,antibody,frag,ment,scFv,感染者,恢复期,外周血单核细胞,peripheral,blood,mononuclear,cells,PBMCs,轻链,可变区,拼接,基因克隆,质粒,5E,感受态,原核表达,库容,共获,白发,特异性结合,毒株,中和作用
AB值：
0.230682
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