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牛冠状病毒N蛋白抗体库构建与单链抗体筛选
文献摘要：
为快速筛选获得牛冠状病毒(BCoV)特异性抗体,本试验用重组的牛冠状病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,从免疫小鼠脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,采用重叠延伸PCR法将VH、VL拼接为完整的单链抗体(scFv)基因,将scFv基因与酶切的噬菌粒连接,电转入感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体抗体库,测定库容为8×108 PFU.自库中随机挑取15个单克隆的噬菌体通过PCR鉴定,结果显示其中13个克隆扩增出约800 bp大小的目的片段,阳性率为86.7％,说明噬菌体抗体库构建成功.该抗体库经4轮富集淘选和酶联免疫吸附试验检测,最终获得32株与N蛋白特异性反应的噬菌体克隆.将32株阳性克隆进行PCR鉴定并测序,分析序列后发现有19株阳性单链抗体基因正确,选取阳性值较高的5株阳性单链抗体检测其噬菌体抗体结合活性,其中阳性单链抗体scFv-154与N蛋白的结合活性较高.本试验为进一步探讨单链抗体在牛冠状病毒病诊断和防控技术领域的应用提供了依据.
文献关键词：
BCoV;N蛋白;单链抗体;噬菌体展示
中图分类号：
作者姓名：
肖丽荣;李彬;王家伟;成杰;别鹏飞;史秋梅
作者机构：
河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室,河北秦皇岛066604;秦皇岛市抚宁区农业农村局留守营动物防疫监督站,河北抚宁066301;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193
文献出处：
引用格式：
[1]肖丽荣;李彬;王家伟;成杰;别鹏飞;史秋梅-.牛冠状病毒N蛋白抗体库构建与单链抗体筛选)[J].中国兽医杂志,2022(10):29-34
A类：
B类：
牛冠状病毒,单链抗体,抗体筛选,快速筛选,BCoV,特异性抗体,BALB,脾细胞,录成,cDNA,可变区,VH,轻链,VL,拼接,scFv,噬菌粒,转入,感受态,过夜培养,噬菌体抗体库,库容,PFU,单克隆,bp,淘选,酶联免疫吸附试验,试验检测,阳性值,抗体检测,结合活性,中阳,冠状病毒病,防控技术,技术领域,噬菌体展示
AB值：
0.314675
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