典型文献
水痘-带状疱疹病毒ORF7蛋白原核表达及单抗制备
文献摘要：
水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗株(V-Oka)为混合毒株,仍具备感染和潜伏神经系统的能力,VZV第7个开放阅读框(Open reading frame7,ORF7)嗜神经因子敲除的毒株有望成为更安全的VZV减毒活疫苗株,本文重组表达VZV ORF7蛋白,制备其单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb),建立ORF7荧光抗体检测方法,为新一代ORF7敲除的VZV减毒疫苗的检测提供方法学基础.本研究以V-Oka株orf7为扩增模板,构建重组表达质粒pET-28a-ORF7,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,镍离子柱亲合层析纯化表达蛋白,WB鉴定重组蛋白的活性,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗VZV ORF7单克隆抗体,对单抗进行鉴定,选取一株稳定、特异、高效的单抗进行纯化并标记异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC).结果显示,重组ORF7蛋白以包涵体形式表达,分子量约29 kD,亲和纯化后纯度约为92.0％,盐酸胍复性蛋白可与VZV全病毒免疫小鼠血清特异性反应.采用杂交瘤细胞融合技术,筛选获得6株杂交瘤细胞,细胞上清单抗效价均达1∶51 200,6株单抗均属于IgG1亚类,抗原结合位点相同或相近,WB鉴定与VZV全病毒、原核及真核ORF7表达蛋白具有特异性反应.所制备FITC-4H7能够有效检出培养过程中ORF7蛋白,初步建立了病毒ORF7荧光抗体检测方法,为新型orf7基因敲除VZV减毒活疫苗毒株传代评价以及相关检测方法的建立奠定了基础.
文献关键词：
水痘-带状疱疹病毒;ORF7基因;原核表达;单克隆抗体;荧光抗体
中图分类号：
作者姓名：
尹婷;姜雪鸥;郭静;袁琳;范丽丽;李晴;陈子杨;常军亮;张夫坤
作者机构：
长春生物制品研究所有限责任公司,长春130012;长春祈健生物制品有限公司,长春130000
文献出处：
引用格式：
[1]尹婷;姜雪鸥;郭静;袁琳;范丽丽;李晴;陈子杨;常军亮;张夫坤-.水痘-带状疱疹病毒ORF7蛋白原核表达及单抗制备)[J].病毒学报,2022(03):658-665
A类：
frame7,orf7,Isothiocyanate,4H7
B类：
水痘,带状疱疹病毒,ORF7,蛋白原,原核表达,单抗,Varicella,zoster,virus,VZV,减毒活疫苗,疫苗株,Oka,毒株,备感,开放阅读框,Open,reading,神经因子,重组表达,单克隆抗体,Monoclonal,antibody,McAb,荧光抗体,抗体检测,减毒疫苗,方法学,质粒,pET,28a,coli,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,镍离子,亲合,层析纯化,WB,重组蛋白,BALB,杂交瘤技术,一株,异硫氰酸荧光素,Fluorescein,FITC,包涵体,分子量,kD,亲和纯化,盐酸胍,小鼠血清,杂交瘤细胞,细胞融合,融合技术,上清,效价,IgG1,亚类,抗原结合,结合位点,培养过程,基因敲除,疫苗毒,传代,相关检测
AB值：
0.34661
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
