典型文献
大肠杆菌噬菌体Bp4尾部蛋白在宿主识别中的作用研究
文献摘要：
为了研究大肠杆菌噬菌体Bp4尾部蛋白中的假定蛋白gp10、尾丝蛋白gp11和尾刺蛋白gp13在噬菌体吸附宿主菌中的作用,本研究经PCR扩增gp10、gp11和gp13基因,克隆至原核表达质粒pco1dTF中,构建重组质粒pcoldTF-gp10、pcoldTF-gp11、pcoldTF-gp13,并分别在E.coli BL21(DE3)中经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定,结果显示各重组蛋白均获得了表达.将获得的各尾部蛋白纯化后分别4次免疫家兔,获得的各重组蛋白的多克隆抗体(anti-gp10、anti-gp11、anti-gp13)经琼脂双向扩散试验测定效价,分别为1∶4、1∶8、1∶8.将各尾部蛋白与O78血清型大肠杆菌孵育10 min后,加入噬菌体Bp4增殖液进行竞争吸附试验,5 min后利用双层平板法检测并计数噬菌斑,计算噬菌体对大肠杆菌的相对吸附率;分别将各多克隆抗体与噬菌体孵育5 min以阻断噬菌体对大肠杆菌的吸附,再加入大肠杆菌5 min后采用上述双层平板法检测并计数大肠杆菌的噬菌斑,计算噬菌体对大肠杆菌的相对吸附率.尾部蛋白竞争吸附试验结果显示,gp13组中噬菌体对大肠杆菌的相对吸附率为0,与对照组差异极显著(P＜0.01);而gp10组和gp11组中噬菌体对大肠杆菌的相对吸附率均为100％,均与对照组无差异,表明gp13能有效抑制噬菌体Bp4对宿主菌的吸附,而gp10和gp11则无此抑制作用.抗体阻断吸附试验结果显示,anti-gp11和anti-gp13组中噬菌体对大肠杆菌的相对吸附率均为0,与对照组差异均极显著(P＜0.05);而anti-gp10组与对照组中噬菌体对宿主菌的相对吸附率均为100％,表明anti-gp13和anti-gp11均能够完全阻断噬菌体对宿主菌的吸附,而anti-gp10对其的吸附无阻断作用.上述结果首次证实大肠杆菌尾部蛋白gp13是大肠杆菌噬菌体Bp4吸附宿主菌的关键蛋白,本实验为研究噬菌体Bp4的感染机制及拓宽该噬菌体的宿主谱奠定了基础.
文献关键词：
噬菌体Bp4;假定蛋白gp10;尾丝蛋白gp11;尾刺蛋白gp13;宿主识别
中图分类号：
作者姓名：
李兴健;孙蓉蓉;张灿;刘文华;邹玲;任慧英
作者机构：
青岛农业大学动物医学院,山东 青岛 266109
文献出处：
引用格式：
[1]李兴健;孙蓉蓉;张灿;刘文华;邹玲;任慧英-.大肠杆菌噬菌体Bp4尾部蛋白在宿主识别中的作用研究)[J].中国预防兽医学报,2022(04):377-381,410
A类：
Bp4,gp10,尾丝蛋白,gp11,gp13,pco1dTF,pcoldTF
B类：
大肠杆菌,噬菌体,尾部,宿主识别,假定,宿主菌,原核表达,重组质粒,coli,BL21,DE3,IPTG,SDS,PAGE,重组蛋白,蛋白纯化,家兔,多克隆抗体,anti,琼脂,双向扩散,扩散试验,效价,O78,血清型,孵育,竞争吸附,吸附试验,双层平板,菌斑,吸附率,无阻,关键蛋白,感染机制
AB值：
0.137068
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