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羊源A型产气荚膜梭菌α毒素基因截短表达及其间接ELISA方法的建立与应用
文献摘要：
基于GenBank登录的产气荚膜梭菌α毒素的氨基酸序列进行抗原决定簇及抗原性的分析,确定优势抗原区(101 aa～334 aa).设计合成1对引物,以A型产气荚膜梭菌的DNA为模板,应用PCR方法扩增出702 bp大小的基因片段,克隆至表达载体pET32a(+)中进行原核表达.经亲和层析纯化的蛋白,Western blot鉴定相对分子质量约为43 kDa.以纯化的截短α毒素蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法,最适条件:2 mg/L重组蛋白100 μL/孔、4℃过夜包被,血清样本1 ∶ 50稀释、37℃孵育40 min,HRP标记二抗1 ∶2 500稀释、37℃孵育40 min,底物37℃显色10 min后终止反应.使用建立的方法对226份临床羊血清进行检测,阳性率为71.68％.结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于羊群疫苗免疫后的抗体监测及流行病学调查,为试剂盒的开发奠定了基础.
文献关键词：
羊源产气荚膜梭菌;α毒素;截短表达;间接ELISA;抗体检测
中图分类号：
作者姓名：
李通;孟卫芹;马力;陈金龙;沈志强;王金良;韩先杰
作者机构：
青岛农业大学动物医学院,山东青岛266109;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600
文献出处：
引用格式：
[1]李通;孟卫芹;马力;陈金龙;沈志强;王金良;韩先杰-.羊源A型产气荚膜梭菌α毒素基因截短表达及其间接ELISA方法的建立与应用)[J].中国兽医学报,2022(12):2407-2412
A类：
羊源产气荚膜梭菌
B类：
毒素基因,截短表达,其间,建立与应用,GenBank,登录,氨基酸序列,抗原决定簇,抗原性,aa,设计合成,引物,bp,表达载体,pET32a,原核表达,亲和层析,层析纯化,blot,相对分子质量,kDa,毒素蛋白,包被抗原,重组蛋白,过夜,血清样本,孵育,HRP,底物,显色,羊血,羊群,疫苗免疫,抗体监测,流行病学调查,试剂盒,抗体检测
AB值：
0.388634
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