典型文献
腐败梭菌α毒素蛋白单克隆抗体制备
文献摘要：
将腐败梭菌参考株增殖、鉴定,使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然 α 毒素,并通过SDS-PAGE方法对其进行检测.将扩增的 α 毒素目的片段和经酶切的pET-21a(+)载体同源重组,将构建好的重组质粒转入到BL21(DE3)感受态细胞中,并筛选阳性克隆株.在优化的表达条件下,对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达.免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞筛选.制备及纯化腹水,进行效价、浓度、纯度及特异性测定.结果表明,本研究成功表达了可溶性腐败梭菌 α 毒素蛋白,大小约为46 kDa,筛选出的单抗3 E8和单抗6B12对重组蛋白效价检测结果均为1:256000,对天然 α 毒素的效价检测结果均为1:128000;纯度均已达到85％ 以上;单克隆抗体的浓度分别为3E8:2.27 mg/ml,6B12:1.96 mg/ml;均能够与腐败梭菌重组 α 毒素、天然 α 毒素特异性结合,而与产气荚膜梭菌 α 毒素无交叉反应.结论:得到特异性强、稳定性高的单抗3E8和单抗6B12,有助于腐败梭菌病的早期诊断及研究.
文献关键词：
腐败梭菌;α毒素;原核表达;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
林静;苗润春;韩四娥;贾青燕;伏刚;冉智光;杨晓雪;李明勇;柴同杰;韦良孟
作者机构：
山东农业大学动物科技学院,山东泰安 271018;金宇保灵生物药品有限公司,内蒙古呼和浩特;青海生物药品厂有限公司,青海 西宁;重庆澳龙生物制品有限公司,重庆;山东省动物疫病预防与控制中心/山东人畜共患病流调监测中心,山东 济南;青岛康大佳牧畜禽良种繁育有限公司,山东 青岛
文献出处：
引用格式：
[1]林静;苗润春;韩四娥;贾青燕;伏刚;冉智光;杨晓雪;李明勇;柴同杰;韦良孟-.腐败梭菌α毒素蛋白单克隆抗体制备)[J].山东畜牧兽医,2022(11):5-9
A类：
6B12,3E8
B类：
腐败梭菌,毒素蛋白,单克隆抗体,抗体制备,饱和硫酸铵,沉淀法,SDS,PAGE,pET,21a,同源重组,建好,重组质粒,转入,BL21,DE3,感受态,重组蛋白,BALB,脾细胞,SP2,骨髓瘤细胞,细胞融合,杂交瘤细胞,腹水,kDa,单抗,效价检测,ml,特异性结合,产气荚膜梭菌,交叉反应,原核表达
AB值：
0.281489
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