为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达纯化的PEDV S2重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种PEDV重组S2蛋白的间接ELISA抗体检测方法.结果显示,重组蛋白抗原最佳包被量0.8 μg/孔;血清最佳稀释倍数为1 ∶40,最佳血清孵育时间为120 min;酶标二抗最佳工作浓度为1 ∶4000,最佳二抗反应时间为45 min;最佳底物显色时间为15 min;待检血清样品S/P值＞0.212时判定为阳性,待检血清样品S/P值＜0.188时判定为阴性,当0.188≤待检血清样品S/P值≤0.212时判定为可疑.以S2蛋白作为包被抗原建立的PEDV抗体间接ELISA方法仅对PEDV血清检测为阳性,与猪瘟病毒、猪丁型冠状病毒等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性.该方法检测灵敏度较高、重复性好,批内和批间重复性变异系数均小于10％.利用本研究建立的PEDV S2蛋白间接ELISA抗体检测方法对广西地区不同阶段猪群血清样品共计622份进行检测,总体样品阳性率为76.05％,不同阶段阳性率相差较大.本实验建立的ELISA方法可应用于临床样品PEDV抗体检测以及PEDV血清流行病学调查.

猪流行性腹泻病毒;S2基因;ELISA

广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室,南宁530001;广西农业职业技术大学,南宁530007;广西大学,南宁530005

[1]秦毅斌;刘磊;卢冰霞;段群棚;何颖;陈忠伟;周英宁;李斌;赵硕;梁家幸;苏乾莲;蒋冬福;赵武-.猪流行性腹泻病毒重组S2蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用)[J].中国动物传染病学报,2022(05):74-82

猪流行性腹泻病毒,病毒重组,S2,抗体检测,初步应用,PEDV,血清学,原核表达,表达纯化,重组蛋白,包被抗原,反应条件优化,倍数,孵育时间,底物,显色,清样,可疑,血清检测,猪瘟病毒,猪丁型冠状病毒,猪源,病毒阳性,阳性血清,交叉反应,检测灵敏度,广西地区,猪群,样品阳性率,血清流行病学调查

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