典型文献
胞内劳森氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
文献摘要：
为建立胞内劳森氏菌(LI)抗体的间接ELISA检测方法,本研究构建了含有LI外膜蛋白基因的重组质粒pET32-LI1022并进行原核表达.结果显示LI1022基因在BL21(DE3)宿主菌内以可溶性表达重组LI1022蛋白(rLI1022),western blot结果显示rLI1022具有较好的反应原性,可作为建立间接ELISA检测方法的包被抗原.进一步经Ni柱纯化获得纯化rLI1102,以其为包被抗原,对ELISA条件进行优化,结果显示纯化的rLI1022以4.69 ng/孔4℃过夜包被最佳;血清最佳反应条件为1∶100稀释,37℃作用1h;羊抗猪IgG-HRP最佳反应条件为1∶10 000稀释,37℃作用1h;25℃TMB底物显色15 min.对建立的间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性进行分析,结果显示包被抗原与PRRSV、PRV、FMDV、PEDV等阳性血清均无交叉反应,仅可特异性检测LI抗体;当LI阳性血清稀释倍数为1∶400时仍为阳性,表明该方法敏感性较好;批内、批间重复性试验变异系数均小于10％.与国外商品化ELISA检测试剂盒对比,二者的符合率达94.44％;利用所建立的间接ELISA方法对江苏部分地区319份临床猪血清样品进行检测,其中LI阳性检出率为87.77％,表明LI在江苏猪群中普遍存在.本研究首次建立了检测LI的间接ELISA方法,为临床LI血清流行病学调查提供了可行技术手段.
文献关键词：
胞内劳森氏菌;间接ELISA;抗体检测;LI1022重组蛋白
中图分类号：
作者姓名：
王丹丹;周俊明;倪艳秀;祝昊丹;朱雪蛟;周金柱;李彬
作者机构：
江苏省农业科学院兽医研究所,江苏 南京 210014
文献出处：
引用格式：
[1]王丹丹;周俊明;倪艳秀;祝昊丹;朱雪蛟;周金柱;李彬-.胞内劳森氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立及应用)[J].中国预防兽医学报,2022(04):396-401,444
A类：
pET32,LI1022,rLI1022,rLI1102
B类：
胞内劳森氏菌,抗体检测,建立及应用,研究构建,外膜蛋白,重组质粒,原核表达,BL21,DE3,宿主菌,可溶性表达,western,blot,反应原性,包被抗原,过夜,反应条件,1h,IgG,HRP,TMB,底物,显色,PRRSV,PRV,FMDV,PEDV,阳性血清,交叉反应,特异性检测,倍数,重复性试验,外商,商品化,检测试剂盒,符合率,猪血,清样,阳性检出率,猪群,首次建立,血清流行病学调查,重组蛋白
AB值：
0.320658
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