典型文献
猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立
文献摘要：
采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了 17株特异性单抗.经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1 ∶ 10 240.采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法.该方法优化后的抗原包被浓度为0.5pg/mL,阻断抗体稀释度为1 ∶ 8 000.通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30％.该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶ 16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90％～3.21％、1.89％～6.57％,均小于10％.对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3％、94.7％.用该方法对南京市浦口区某养殖场猪瘟疫苗免疫猪血清进行检测,抗体阳性率为80.8％(189/234),证明了该疫苗免疫效果良好.此外,该方法为一步法,与现有方法相比,检测过程缩短至40min.试验结果表明,利用酵母表达E2蛋白并制备中和抗体,建立了一种更加高效检测猪瘟中和抗体的阻断ELISA方法.
文献关键词：
CSFV;高效中和抗体;阻断ELISA;毕赤酵母;重组CSFV E2蛋白
中图分类号：
作者姓名：
杨利;张浩明;李丁;郑其升;芮荣
作者机构：
南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;江苏省农业科学院,江苏南京 210014
文献出处：
引用格式：
[1]杨利;张浩明;李丁;郑其升;芮荣-.猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立)[J].畜牧与兽医,2022(05):68-74
A类：
3H9,高效中和抗体
B类：
猪瘟病毒,中和性单克隆抗体,抗体制备,毕赤酵母,酵母表达,CSFV,E2,BALB,间接免疫荧光,IFA,单抗,病毒中和试验,VNT,中和活性,中和效价,HRP,包被抗原,猪血,方法优化,5pg,cut,off,抗体效价,价低,血清检测,阳性反应,猪病,牛病毒性腹泻病毒,BVDV,阴性反应,可重复性,IDEXX,抗体检测,检测试剂盒,符合率,浦口区,养殖场,猪瘟疫苗,疫苗免疫,抗体阳性率,免疫效果,一步法,检测过程,40min,高效检测
AB值：
0.290691
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