典型文献
猪瘟病毒Erns和E2蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
文献摘要：
本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法.SDS-PAGE结果显示,分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白,rErns重组蛋白主要在上清液中存在,rE2重组蛋白主要以包涵体形式存在.Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性.通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了Erns蛋白最佳包被量为2.5μg/mL,rE2蛋白最佳包被量为0.625μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1:100,最佳封闭液为0.25％PVA溶液,HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1:2000,临界值分别为0.24和0.33.上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1:1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10％.本研究建立的间接ELISA方法可初步应用于CSFV Erns和E2抗体的检测,鉴别E2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪瘟净化工作的实施.
文献关键词：
猪瘟病毒;Erns基因;E2基因;蛋白表达;间接ELISA
中图分类号：
作者姓名：
张洪亮;郝占武;林喜平;张志;王凤雪;解倩倩;韩先杰;单虎;温永俊
作者机构：
内蒙古农业大学兽医学院 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;青岛农业大学动物医学院 山东省新兽药创制协同创新中心 青岛市兽医生物技术工程研究中心,青岛266109;兴安盟五岔沟国有林管理局,阿尔山137803;中国动物卫生与流行病学中心,青岛266032
文献出处：
引用格式：
[1]张洪亮;郝占武;林喜平;张志;王凤雪;解倩倩;韩先杰;单虎;温永俊-.猪瘟病毒Erns和E2蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立)[J].中国动物传染病学报,2022(01):76-83
A类：
pET32aEK,rErns,rE2
B类：
猪瘟病毒,重组表达,CSFV,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,诱导表达,重组蛋白,包被抗原,SDS,PAGE,kDa,上清液,包涵体,blot,免疫原性,方阵,反应条件优化,倍数,封闭液,PVA,HRP,IgG,阳性血清,初步应用,亚单位疫苗,疫苗免疫,免疫抗体,野毒感染,感染抗体
AB值：
0.250907
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