典型文献
人β-半乳糖苷酶R299L突变体的获得与活性研究
文献摘要：
目的:GM1神经节昔脂贮积症是一种由半乳糖昔酶beta 1(galactosidase beta 1,GLB1)基因突变引起的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)活性降低导致的严重的溶酶体贮积病.该病以进行性、致命性神经退行性病变为特征,目前尚无有效的治疗手段,AAV载体介导的基因治疗被认为是最有希望的治疗方法.通过基因定点突变获得具有较高β-gal活性的GLB1突变体,以期用于后续AAV介导的基因治疗.方法:对人类和其他6种脊椎动物GLB1基因进行多序列比对分析,筛选出部分氨基酸位点进行定点突变,采用携带突变位点的重组质粒和AAV9载体转染或感染HEK-293细胞,比较突变体与未突变体的活性差异.对GM1模型鼠注射携带coGLBl-R299L的rAAV9病毒,探究该突变体的体内活性表达.结果:从15个突变体中筛选出coGLBl-R299L突变体,经质粒转染导入细胞后,其β-gal活性比具有野生型氨基酸序列的coGLBl增加了 30％～40％.AAV体外感染实验中,rAAV9-coGLBl-R299L组的β-gal活性较未感染的细胞对照组提升了约2.2倍.体内结果显示,rAAV9-coGLBl-R299L在模型鼠体内广泛表达,心脏、肝脏、脾脏、肺、脑组织中β-gal活性显著提升.结论:获得了具有更高β-gal活性的突变体coGLBl-R299L,初步探究了 rAAV9-coGLBl-R299L的体外表达效果和模型鼠体内β-半乳糖苷酶的表达与分布,为该突变体应用于AAV介导的GM1神经节苷脂病治疗奠定基础.
文献关键词：
GM1神经节苷脂贮积症;半乳糖昔酶beta 1基因;β-半乳糖昔酶;腺相关病毒载体;定点突变
中图分类号：
作者姓名：
章嫣;马文豪;赵天意;吴小兵;盛望;杨怡姝
作者机构：
北京工业大学生命科学与生物工程学院 北京 100124;北京锦篮基因科技有限公司 北京 100023
文献出处：
引用格式：
[1]章嫣;马文豪;赵天意;吴小兵;盛望;杨怡姝-.人β-半乳糖苷酶R299L突变体的获得与活性研究)[J].中国生物工程杂志,2022(09):39-49
A类：
R299L,coGLBl
B类：
半乳糖,糖苷酶,突变体,活性研究,GM1,贮积,糖昔酶,beta,galactosidase,GLB1,基因突变,溶酶体,积病,致命性,神经退行性病变,治疗手段,基因治疗,基因定点突变,脊椎动物,多序列比对,比对分析,氨基酸位点,突变位点,重组质粒,HEK,rAAV9,质粒转染,野生型,氨基酸序列,外感,未感染,脾脏,脑组织,体外表达,表达效果,神经节苷脂,腺相关病毒载体
AB值：
0.220842
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