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柯萨奇病毒A组6型VP1与白喉毒素无毒突变体GRM197融合蛋白的原核表达及其免疫原性
文献摘要：
目的 原核表达柯萨奇病毒A组6 型(coxsackievirus A6,CVA6)VP1蛋白与白喉毒素无毒突变体CRM197片段A的融合蛋白(CRM197A-CVA6 VP1),并评价其免疫原性.方法 将经密码子优化的CRM197A基因与CVA6 VP1基因连接,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-CRM197A-CVA6 VP1,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA柱层析及透析复性后获得重组蛋白CRM197A-CVA6 VP1,检测重组 蛋白的粒径及电位,并进行蛋白荧光光谱检测.经沙鼠腹腔注射免疫铝佐剂吸附的重组蛋白CRM197A-CVA6 VP1,20 μg/(只·0.5 mL),同时设对照组(等体积的铝佐剂);1周后进行加强免疫,免疫途径及剂量同上.首次免疫后4周,经沙鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法检测血清结合抗体,微量细胞病变法检测血清中和效价.相同方法对沙鼠进行分组及给药,于初次免疫4周后,经沙鼠腹腔接种CVA6病毒液,1×104 TCID50/只,观察沙鼠的存活情况.结果 测序结果表明,重组表达质粒pET-28a-CRM197A-CVA6 VP1构建正确.重组蛋白CRM197A-CVA6 VP1的粒径为81.16 nm,电位为23.12 mV,280 nm激发光下检测到最大发射波长为353 nm,纯度达88.3％.试验组及对照组沙鼠血清中结合抗体效价的几何平均数分别为44 565和0,中和抗体效价的几何平均数分别为30.4和0,两组间结合抗体效价和中和抗体效价的几何平均数差异均有统计学意义(P均＜0.05).对照组沙鼠于攻毒后第3天开始出现死亡,第13天全部死亡;试验组沙鼠在攻毒过程中未发现死亡,保护率达100％.结论 原核表达的重组蛋白CRM197A-CVA6 VP1在沙鼠体内可产生良好的免疫原性.
文献关键词：
柯萨奇病毒A组6型;外壳蛋白VP1;原核表达;白喉毒素无毒突变体CRM197;免疫原性
中图分类号：
作者姓名：
沈钱通;李思奇;安彤;杨宏宏;张柯欣;陈刚;庄昉成;高孟
作者机构：
杭州医学院基础医学与法医学院,浙江杭州310053
文献出处：
引用格式：
[1]沈钱通;李思奇;安彤;杨宏宏;张柯欣;陈刚;庄昉成;高孟-.柯萨奇病毒A组6型VP1与白喉毒素无毒突变体GRM197融合蛋白的原核表达及其免疫原性)[J].中国生物制品学杂志,2022(09):1050-1054
A类：
GRM197,CRM197A
B类：
柯萨奇病毒,VP1,白喉毒素,无毒,突变体,融合蛋白,免疫原性,coxsackievirus,CVA6,经密,密码子优化,原核表达载体,pET,28a,重组表达,质粒,化感,感受态,coli,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,目的蛋白,NTA,柱层析,重组蛋白,荧光光谱,光谱检测,沙鼠,腹腔注射,铝佐剂,加强免疫,免疫途径,同上,眼眶,采血,清结,细胞病变,变法,中和效价,毒液,TCID50,存活情况,mV,抗体效价,几何平均,平均数,中和抗体,攻毒,天开,天全,保护率,外壳蛋白
AB值：
0.250195
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