典型文献
PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究
文献摘要：
H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行.PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关.为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含H3N2 CIV各基因节段的重组质粒及携带M1R(PB1-F2的aa1由M突变为R)及S11Stop(PB1-F2 aa11由S突变为终止氨基酸序列)突变的重组质粒pHW-PB1-F2-M1R和pHW-PB1-F2-S11Stop,并均经测序鉴定.通过反向遗传操作技术,分别拯救了如下3株重组病毒:表达90个氨基酸PB1-F2的重组亲本病毒rH3N2;不表达PB1-F2的重组病毒rH3N2-M1R;仅表达11个氨基酸PB1-F2的重组病毒rH3N2-S11Stop.将这3株重组病毒利用MDCK细胞传代后分别对其8个基因节段经PCR扩增及测序以鉴定其遗传稳定性.测序鉴定结果显示,3株重组病毒均正确构建,且不同代次之间各重组病毒的基因序列及各突变位点均相同,表明本研究构建的重组病毒具有较好的遗传稳定性.将表达PB1、PB1-F2-M1R及PB1-F2-S11Stop的重组质粒分别与重组质粒PB2、PA和荧光素酶报告质粒pPolI-Luci-NP及海肾荧光素酶表达质粒共转染293T细胞,48 h后利用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性并比较3株重组病毒的聚合酶活性;测定3株重组病毒感染MDCK细胞后不同时间的TCID50以绘制病毒的生长曲线;将3株重组病毒均以106 TCID50/50μL经鼻腔感染小鼠,分析各重组病毒对小鼠的致病性.用以评价PB1-F2长度改变对H3N2 CIV的影响.结果显示,rH3N2-S11Stop的聚合酶活性与rH3N2相比无明显变化,而rH3N2-M1R的聚合酶活性则显著高于rH3N2(P<0.05);rH3N2-M1R和rH3N2-S11Stop在MDCK细胞中的复制效率显著高于rH3N2(P<0.05),且rH3N2-M1R的复制效率要高于rH3N2-S11Stop.小鼠的致病性试验结果显示,感染重组病毒后的小鼠表现被毛粗乱、精神不振、食欲减退等症状;3株重组病毒均对小鼠体质量有轻微影响,并对小鼠肺脏均造成了轻微病理损伤,但三者对小鼠体质量及肺脏的影响差别不明显.本实验结果首次证实,PB1-F2的不表达能够提高H3N2 CIV的转录效果,且PB1-F2长度的改变能够提高H3N2 CIV在细胞中的复制效率,但对病毒在小鼠中致病性的影响较小.本研究初步探究了PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,为该病毒致病机制及其感染防控技术的研究与制定提供了参考依据.
文献关键词：
犬流感病毒;反向遗传;定点突变;PB1-F2
中图分类号：
作者姓名：
原耀贤;李舜;何威;李康健;马春全;李守军;马骏
作者机构：
佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东 佛山 528225;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 201100;广州市微生物研究所有限公司,广东 广州 510700;华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642
文献出处：
引用格式：
[1]原耀贤;李舜;何威;李康健;马春全;李守军;马骏-.PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究)[J].中国预防兽医学报,2022(03):243-249
A类：
M1R,aa1,S11Stop,aa11,pHW,rH3N2,pPolI,Luci
B类：
PB1,F2,犬流感病毒,CIV,甲型流感病毒,毒力因子,宿主,节段,重组质粒,氨基酸序列,反向遗传操作技术,拯救,株重,重组病毒,亲本,本病,MDCK,传代,遗传稳定性,基因序列,突变位点,研究构建,PB2,PA,NP,共转染,293T,双荧光素酶,检测试剂盒,荧光素酶活性,聚合酶活性,TCID50,生长曲线,鼻腔感染,致病性试验,被毛,精神不振,食欲减退,肺脏,病理损伤,致病机制,感染防控,防控技术,定点突变
AB值：
0.151228
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