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利用拆分绿色荧光蛋白检测端粒酶TERT亚基与端粒末端蛋白TPP1的相互作用
文献摘要：
目的:构建pCDH-Flag-NGFP-TERT、pCDH-Myc-TPP1-CGFP基因的真核表达载体,验证TPP1-CGFP蛋白能募集到端粒区,并通过GFP蛋白自发重建检测TERT与TPP1的相互作用.方法:以相应质粒为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增出NGFP、CGFP、TPP1的CDS区编码序列.通过酶切、重组将NGFP插入到pCDH-Flag-TERT载体上,将TPP1-CGFP插入到pCDH-Myc-POT1-v5tag载体上.经菌液PCR、载体酶切及测序验证后转染到293T细胞中,采用蛋白质印迹法检测其表达,免疫荧光和端粒Fish验证TPP1-CGFP能募集到端粒区,将TPP1-CGFP与NGFP-TERT共转重新组装成GFP蛋白验证其相互作用.结果:双酶切结果显示载体构建成功;Western blot结果显示蛋白质成功表达;免疫荧光及端粒Fish显示TPP1-CGFP能募集到端粒区,质粒共转能重新组装成GFP蛋白说明两者有相互作用.结论:真核表达载体构建成功,并证明TPP1-CGFP能募集到端粒区,且拆分后的GFP蛋白能由连接蛋白的相互作用而重新组装并发绿色荧光,为研究端粒酶与TPP1蛋白及端粒的相互作用提供了可视化的细胞模型.
文献关键词：
拆分绿色荧光蛋白;端粒;端粒酶;TPP1
中图分类号：
作者姓名：
李江波;郭鸿斌;王诗昆;金蕊;程龙
作者机构：
军事科学院军事医学研究院生物工程研究所 北京 100089;陆军边防第三六一团卫生队 西藏 859600;新疆军区信息通信旅 西藏 859499
文献出处：
引用格式：
[1]李江波;郭鸿斌;王诗昆;金蕊;程龙-.利用拆分绿色荧光蛋白检测端粒酶TERT亚基与端粒末端蛋白TPP1的相互作用)[J].中国生物工程杂志,2022(01):80-87
A类：
拆分绿色荧光蛋白,TPP1,NGFP,CGFP,POT1,v5tag
B类：
蛋白检测,端粒酶,TERT,亚基,pCDH,Flag,Myc,真核表达载体,募集,质粒,聚合酶链反应,polymerase,chain,reaction,CDS,编码序列,菌液,转染,293T,蛋白质印迹法,免疫荧光,Fish,装成,双酶,切结,blot,质成,表达载体构建,连接蛋白,发绿,白及,细胞模型
AB值：
0.179427
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