典型文献
端粒逆转录酶基因(TERT)修饰对蒙古羊输卵管上皮细胞体外增殖能力的影响
文献摘要：
输卵管上皮细胞(oviduct epithelial cells,OECs)能够提供理想的生理生化环境、支持胚胎发育,但其体外增殖能力较弱,无法满足实验研究与应用需求.本研究将外源性端粒逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase,TERT)转入蒙古羊(Ovis aries)输卵管上皮细胞(sheep OCEs,SOECs)并观察TERT基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞(TERT-SOECs)的体外增殖能力.首先经酶消化法建立了SOECs系,将重组质粒pCI-neo-TERT以脂质体法转染至原代SOECs;经G418抗性筛选,得到稳定表达TERT基因的SOECs,qPCR检测了TERT基因在细胞中的表达;免疫荧光法检测上皮细胞特异性标志物角蛋白18(cytokeratin18,CK18)并对TERT-SOECs进行生长曲线拟合和活性测定.结果显示,成功将TERT基因导入了SOECs,PCR检测表明细胞表达了276 bp的TERT基因片段,TERT基因表达量极显著高于未转染和转染pCI-neo空载体的SOECs(P<0.001);转染后的细胞仍保留了SOECs的生物学特性,P5 TERT-SOECs倍增时间为46.61 h,而P5 SEOCs倍增时间为65.03 h,TERT-SOECs体外增殖速度明显高于SOECs.综上,本研究成功建立了有较强体外增殖能力的TERT-SOECs系,为种质资源细胞库提供了种子细胞.
文献关键词：
端粒逆转录酶(TERT);蒙古羊输卵管上皮细胞(SOECs);体外增殖;脂质体法
中图分类号：
作者姓名：
刘洋;海勒思;刘永斌;刘春霞;曹俊伟;张焱如
作者机构：
内蒙古农业大学生命科学学院,呼和浩特010018;内蒙古自治区生物制造重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古自治区农牧业科学院,呼和浩特010031
文献出处：
引用格式：
[1]刘洋;海勒思;刘永斌;刘春霞;曹俊伟;张焱如-.端粒逆转录酶基因(TERT)修饰对蒙古羊输卵管上皮细胞体外增殖能力的影响)[J].农业生物技术学报,2022(04):686-694
A类：
oviduct,OCEs,SOECs,cytokeratin18,SEOCs
B类：
端粒,逆转录酶,酶基因,TERT,蒙古羊,输卵管上皮细胞,细胞体,体外增殖能力,epithelial,cells,生理生化,胚胎发育,应用需求,外源性,telomerase,reverse,transcriptase,转入,Ovis,aries,sheep,基因修饰,酶消化法,重组质粒,pCI,neo,脂质体法,转染,原代,G418,抗性筛选,稳定表达,qPCR,免疫荧光法,细胞特异性,角蛋白,CK18,生长曲线拟合,活性测定,明细,bp,基因表达量,空载,生物学特性,P5,倍增时间,强体,种质资源,种子细胞
AB值：
0.243329
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