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利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因
文献摘要：
成纤维细胞生长因子5(FGF5)是影响毛囊周期性活动及毛发生长的重要生长因子.本研究利用CRISPR/Cas9n系统靶向编辑绵羊成纤维细胞中FGF5基因.首先利用Gibson Assembly法将U6启动子引导表达单导向RNA(sgRNA)的原件构建至pX461质粒中,获得pX461-U6质粒;再将设计并合成好的1对靶向FGF5基因第3外显子的sgRNA及其互补链,经退火连接形成sgRNA-sg1和sgRNA-sg2双链后,分别克隆至带有Bbs Ⅰ和Bsa Ⅰ黏性末端的pX461-U6质粒.构建好的重组质粒pX461-U6-sg1+sg2经测序鉴定后,以电转染的方式转入绵羊成纤维细胞,72 h后收集细胞进行检测分析.经T7E1酶切检测分析表明,成功获得1对具有靶向效果的sgRNA,PCR扩增的FGF5基因片段经TA克隆后进行测序鉴定,结果sgRNA-sg1+sg2在靶位点的打靶效率为100％;缺失的核苷酸数从10到64个不等;基于预测的3D模型和RT-PCR结果显示,FGF5基因的突变将会影响FGF5蛋白与其受体的结合,导致FGF5蛋白失去其生物学功能.本研究构建了可以在同一载体中同时表达2条sgRNA和Cas9n以及绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,瞬时转染至绵羊成纤维细胞后,成功获得了高效靶向绵羊FGF5基因的sgRNA位点,为精确和高效的靶向基因工程提供了科学依据.
文献关键词：
绵羊;成纤维细胞生长因子5;CRISPR/Cas9n;基因敲除
中图分类号：
作者姓名：
蒙亚琦;姚旭东;任秀美奥;郭延华;唐红;张译元;王立民;周平
作者机构：
石河子大学动物科技学院,新疆石河子 832000;省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院,新疆石河子 832000
文献出处：
引用格式：
[1]蒙亚琦;姚旭东;任秀美奥;郭延华;唐红;张译元;王立民;周平-.利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因)[J].畜牧与兽医,2022(01):8-15
A类：
Cas9n,pX461,sg1,sg2,Bbs,Bsa,sg1+sg2
B类：
CRISPR,统编,绵羊,成纤维细胞生长因子,FGF5,毛囊周期,毛发生长,研究利用,Gibson,Assembly,U6,启动子,sgRNA,原件,并合,对靶,外显子,退火,双链,别克,黏性,建好,重组质粒,电转染,转入,检测分析,T7E1,TA,靶位,打靶,生物学功能,研究构建,一载,绿色荧光蛋白,GFP,基因工程,基因敲除
AB值：
0.242869
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