典型文献
与鸡斑点型锌指结构蛋白互作的细胞蛋白筛选及其功能分析
文献摘要：
斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein)protein,SPOP)是E3泛素连接酶Cullin 3家族中的一员,通过与底物蛋白的互作促进底物的泛素化和降解,从而影响底物蛋白的生物学功能.本研究构建了鸡(Gallus gallus)SPOP基因的重组真核表达载体pCMV-HA-SPOP,并将其和空载体pCMV-HA分别转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),提取细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合质谱分析技术筛选和鉴定与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白,并对其进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能注释、KEGG信号通路和蛋白互作网络分析.进一步利用荧光共定位和Co-IP实验,对鸡SPOP蛋白和筛选的细胞蛋白26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(26S proteasome non ATPase regulatory subunit 11,PSMD11)进行相互作用验证.结果显示,重组蛋白HA-SPOP在细胞内得到正确表达,并且主要定位在细胞核和细胞质.利用Co-IP联合质谱分析技术共筛选到158个与鸡SPOP蛋白相互作用的细胞蛋白,主要分布在细胞核、细胞骨架和细胞质,参与了酶活性、核酸结合和蛋白质加工等生物学过程及代谢、核糖体组成和生物调节等信号通路.蛋白互作网络图分析发现,与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白之间存在复杂的相互作用网络,其中蛋白酶体激活物复合物亚单位3(proteasome activator complex subunit 3,PSME3)、PSMD11和H2A组蛋白家族成员Z(H2A histone family,member Z,H2AFZ)3个蛋白可能与鸡SPOP蛋白具有直接的相互作用.荧光共定位和Co-IP实验结果表明,鸡SPOP蛋白与PSMD11蛋白存在相互作用,并且可以改变PMSD11蛋白的细胞内定位.本研究为进一步探究鸡SPOP蛋白在细胞内的生物学功能提供参考.
文献关键词：
鸡;斑点型锌指结构蛋白(SPOP);免疫共沉淀(Co-IP);功能分析
中图分类号：
作者姓名：
王燕碧;赵采芹;唐宏;周磊;韩一帆;邢静如;石海英;段志强
作者机构：
贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室/动物科学学院,贵阳550025
文献出处：
引用格式：
[1]王燕碧;赵采芹;唐宏;周磊;韩一帆;邢静如;石海英;段志强-.与鸡斑点型锌指结构蛋白互作的细胞蛋白筛选及其功能分析)[J].农业生物技术学报,2022(05):944-956
A类：
SPOP,PSMD11,PSME3,PMSD11
B类：
斑点,锌指,结构蛋白,功能分析,speckle,type,POZ,pox,virus,zinc,finger,protein,泛素连接酶,Cullin,一员,底物,泛素化,生物学功能,研究构建,Gallus,gallus,真核表达载体,pCMV,HA,空载,转染,鸡胚成纤维细胞,细胞系,DF,总蛋白,免疫共沉淀,immunoprecipitation,Co,质谱分析技术,技术筛选,基因本体,Gene,Ontology,功能注释,蛋白互作网络分析,共定位,26S,蛋白酶体,调节亚基,proteasome,ATPase,regulatory,subunit,重组蛋白,细胞核,细胞质,蛋白相互作用,细胞骨架,蛋白质加工,生物学过程,核糖体,体组成,网络图,白之,相互作用网络,激活物,复合物,亚单位,activator,complex,白家,histone,family,member,H2AFZ,内定
AB值：
0.355944
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