典型文献
鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)真核表达载体的构建和稳定细胞株的筛选
文献摘要：
血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是肾素血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)的负调节分子和SARS-coV-2等冠状病毒的功能性受体.为丰富禽类鸭(Anas platyrhynchos)ACE2蛋白的研究内容,探寻该蛋白与禽冠状病毒的关系,本研究利用PCR扩增鸭ACE2基因编码区全长,通过同源重组与pcDNA3.1(+)载体连接,构建真核表达体系,确定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞的新霉素(geneticin,G418)最佳筛选浓度,pcDNA3.1(+)-ACE2转染细胞后通过G418加压筛选单克隆细胞,采用Western blot和免疫荧光法对获得的细胞株进行鉴定,建立稳定表达鸭ACE2蛋白的细胞株,并测定其ACE2重组蛋白的酶活性.结果显示,成功克隆了鸭ACE2基因,其编码区全长为2435 bp;成功构建pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,单酶切验证7863 bp左右出现单一条带;脂质体法将重组质粒转染入CHO细胞,可表达外源ACE2重组蛋白;获得3株单克隆细胞株,分别命名为pcDNA3.1(+)-ACE2-1、pcDNA3.1(+)-ACE2-2、pcDNA3.1(+)-ACE2-3;单克隆细胞株中提取的ACE2重组蛋白具有较高的酶活性.本研究构建的鸭ACE2真核表达体系以及获得的可以稳定表达ACE2重组蛋白细胞株,为鸭ACE2蛋白与冠状病毒等生物学功能的研究提供了基础,丰富了该蛋白的相关理论.
文献关键词：
真核表达;脂质体转染;血管紧张素转化酶2(ACE2);细胞株;鸭
中图分类号：
作者姓名：
纪晓霞;李帅;曹西月;张崇昊;张源淑
作者机构：
南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室,南京210095
文献出处：
引用格式：
[1]纪晓霞;李帅;曹西月;张崇昊;张源淑-.鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)真核表达载体的构建和稳定细胞株的筛选)[J].农业生物技术学报,2022(07):1421-1431
A类：
coV,geneticin
B类：
鸭血,血管紧张素转换酶,ACE2,真核表达载体,稳定细胞株,angiotensin,converting,enzyme,肾素血管紧张素系统,renin,system,RAS,SARS,禽类,Anas,platyrhynchos,研究利用,基因编码,编码区,全长,同源重组,pcDNA3,表达体系,仓鼠,Chinese,hamster,ovary,CHO,新霉素,G418,选单,单克隆细胞,blot,免疫荧光法,稳定表达,重组蛋白,bp,真核表达质粒,条带,脂质体法,重组质粒,质粒转染,研究构建,生物学功能,脂质体转染,血管紧张素转化酶
AB值：
0.321499
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