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TRPV4原核表达纯化系统的构建及生物信息学分析
文献摘要：
目的:构建非选择性阳离子通道蛋白TRPV4的原核表达纯化系统,并对其进行生物信息学分析,为与该目标蛋白相关疾病的研究和药物活性成分筛选提供技术支持.方法:将人源TRPV4基因分别克隆至pET-28a(+)、pET-32a、pET-15b、pGEX-5X-1、pEX-4T和pGEX-6p-1等6种表达载体,并利用BL21和Rossetta两种大肠杆菌表达宿主构建TRPV4原核表达系统.采用谷胱甘肽亲和层析和镍柱亲和层析法分离纯化目标蛋白.通过生物信息学技术对目标蛋白进行分析,获得其相应的理化性质和结构参数.结果:利用pGEX-6p-1载体和Rossetta构建了GST-TRPV4和GST-TRPV4-6his融合蛋白原核表达系统.诱导表达目标蛋白的IPTG浓度为0.6 mmol/L时,GST-TRPV4融合蛋白有明显表达,IPTG浓度为0.4 mmol/L时,GST-TRPV4-6his融合蛋白有明显表达,表达温度均为18℃.纯化GST-TRPV4-6his融合蛋白时,咪唑溶液在100 mmol/L或200 mmol/L时可以得到完整的GST-TRPV4-6his融合蛋白.结论:本文首次在原核表达系统中成功构建和表达纯化了人源TRPV4离子通道蛋白,并利用生物信息学分析解析了该蛋白的理化性质,为后续高纯度大量表达和进一步研究奠定了良好的基础.
文献关键词：
TRPV4;离子通道蛋白;原核表达;pGEX-6p-1载体;大肠杆菌;生物信息学
中图分类号：
作者姓名：
李征远;徐恋恋;孙建云;郑晓晖;高小康
作者机构：
湖北医药学院生物医药研究院,湖北十堰 442000;湖北医药学院药学院,湖北十堰 442000;西北大学科学学院,陕西西安 710069
文献出处：
引用格式：
[1]李征远;徐恋恋;孙建云;郑晓晖;高小康-.TRPV4原核表达纯化系统的构建及生物信息学分析)[J].食品工业科技,2022(03):137-144
A类：
pEX,Rossetta,6his
B类：
TRPV4,原核表达,表达纯化,纯化系统,生物信息学分析,非选择性阳离子通道,离子通道蛋白,白相,相关疾病,药物活性成分,活性成分筛选,别克,pET,28a,32a,15b,pGEX,5X,4T,6p,表达载体,BL21,大肠杆菌表达,宿主,表达系统,谷胱甘肽,亲和层析,层析法,分离纯化,生物信息学技术,性质和结构,GST,融合蛋白,蛋白原,诱导表达,IPTG,咪唑,利用生物,高纯度
AB值：
0.26187
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