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典型文献
人源内皮抑素在大肠杆菌中的可溶性表达
文献摘要:
为高效制备人源内皮抑素(human endostatin,hEDN),解决其在大肠杆菌中的可溶性表达.该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别构建了hedn单基因、融合标签共表达和融合表达系统,将重组菌在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下进行摇瓶发酵,通过SDS-PAGE分析及串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight/ionization time of flight,MALDI-TOF/TOF)鉴定hEDN的表达情况.结果表明,在构建的重组菌中只有含有谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)促溶标签的重组菌株BL21(DE3)/pGEX-6p-1-hedn能成功实现hEDN融合蛋白的可溶性表达.进一步地,通过改变诱导温度、诱导时间、诱导剂IPTG浓度及加入诱导剂IPTG时间来优化hEDN融合蛋白的表达条件,最终确定hEDN融合蛋白的最佳发酵条件为20℃,8~12 h加入0.3 mmol/L IPTG诱导36 h.通过亲和层析(PrePack GSH Purose 4 Fast Flow预装柱)初步纯化得到hEDN融合蛋白,经重组PreScission蛋白酶(PreScission protease,PPase)酶切后得到分子质量约为22 kDa的目的条带,与hEDN理论分子质量相一致.该研究为人源多肽的可溶性表达与纯化提供了研究思路,同时对微生物发酵制备功能性多肽具有一定的借鉴意义.
文献关键词:
人源内皮抑素;可溶性表达;融合标签;谷胱甘肽巯基转移酶;多肽
作者姓名:
张吉;吴志勇;朱玲玉;辛瑜;顾正华;石贵阳;张梁
作者机构:
粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),江苏 无锡214122;江南大学 生物工程学院,江苏 无锡,214122
引用格式:
[1]张吉;吴志勇;朱玲玉;辛瑜;顾正华;石贵阳;张梁-.人源内皮抑素在大肠杆菌中的可溶性表达)[J].食品与发酵工业,2022(16):1-10
A类:
人源内皮抑素,hEDN,hedn,PrePack,Purose,PreScission
B类:
大肠杆菌,可溶性表达,高效制备,human,endostatin,BL21,DE3,单基因,融合标签,共表达,融合表达,表达系统,异丙基,半乳糖,糖苷,isopropyl,beta,thiogalactopyranoside,IPTG,摇瓶发酵,SDS,PAGE,飞行时间质谱,matrix,assisted,laser,desorption,ionization,flight,MALDI,TOF,谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione,transferase,GST,促溶,重组菌株,pGEX,6p,融合蛋白,诱导时间,诱导剂,最佳发酵条件,亲和层析,GSH,Fast,Flow,预装,protease,PPase,分子质量,kDa,条带,相一致,多肽,微生物发酵
AB值:
0.35295
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