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金黄色葡萄球菌肠毒素B的中和性全人源抗体制备
文献摘要：
目的:制备靶向金黄色葡萄球菌外分泌蛋白肠毒素B(SEB)的中和性全人源单克隆抗体,为SEB诱发的中毒性休克综合征(SEBILS)提供新的治疗方法.方法:以金黄色葡萄球菌COL基因组为模板,利用PCR技术扩增seb基因,进一步构建原核表达载体pET28a-seb,并克隆至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得SEB蛋白;利用SEB诱导的小鼠SEBILS模型检测SEB活性;进一步通过噬菌体展示技术筛选SEB结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,扩增该抗体的可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体;利用SPR检测其亲和力,通过SEBILS模型验证抗体活性.结果:获得了高纯度重组SEB蛋白,且具有很好的活性;筛选出两株全人源靶向SEB的单克隆抗体YG11-1和YG11-2,SPR结果表明YG11-1、YG11-2的亲和力相当(其KD值分别为16.59 nmol/L和21.35 nmol/L),且YG11-1和YG11-2均能有效抵抗SEB诱导的小鼠中毒性休克综合征,降低小鼠的死亡率,YG11-2(200μg/只)时保护率能够达到100％.结论:本研究获得了具有良好活性的重组SEB蛋白,并制备了抗SEB两株全人源单克隆抗体,为研制SEB中毒治疗制剂提供了新的选择.
文献关键词：
金黄色葡萄球菌;原核表达;重组SEB;中和性全人源单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
刘成华;刘玉;冯健男;沈倍奋;杨光
作者机构：
军事医学研究院毒物药物研究所,北京100850
文献出处：
引用格式：
[1]刘成华;刘玉;冯健男;沈倍奋;杨光-.金黄色葡萄球菌肠毒素B的中和性全人源抗体制备)[J].中国免疫学杂志,2022(12):1480-1483,1493
A类：
中和性全人源单克隆抗体,SEBILS,293E,YG11
B类：
金黄色葡萄球菌肠毒素,全人源抗体,抗体制备,外分泌,分泌蛋白,中毒性休克综合征,COL,seb,原核表达载体,pET28a,大肠杆菌,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,目的蛋白,Ni2+,亲和纯化,模型检测,噬菌体展示技术,技术筛选,序列测定,质粒,可变区,重组表达,转染,Protein,SPR,亲和力,模型验证,高纯度,两株,KD,nmol,保护率
AB值：
0.200709
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