典型文献
结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
文献摘要：
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体.方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体.将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达.用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体.Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价.结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(Mr)38 000位置处有单一条带.纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1:1 300 480以上.结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础.
文献关键词：
结核分枝杆菌;脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15);Rv1040c;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
许涛;李敏英;王楚彤;常先友;钱中清;李柏青;汪洪涛
作者机构：
蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院免疫学教研室,慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院检验医学实验中心,安徽蚌埠233030;蚌埠市第五人民医院感染科,安徽蚌埠233030
文献出处：
引用格式：
[1]许涛;李敏英;王楚彤;常先友;钱中清;李柏青;汪洪涛-.结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备)[J].细胞与分子免疫学杂志,2022(01):78-83
A类：
PPE15,Rv1040c
B类：
结核分枝杆菌,原核表达,多克隆抗体,脯氨酸,谷氨酸,H37Rv,基因组扩增,同源重组,克隆技术,技术构建,组氨酸,pET28a,大肠杆菌,BL21,DE3,异丙基,吡喃,半乳糖,糖苷,IPTG,SDS,PAGE,亲和层析,层析法,NTA,新西兰大白兔,blot,人血清,抗体效价,重组表达,表达载体,包涵体,相对分子质量,Mr,条带,结核病,兔源
AB值：
0.201899
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