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兔抗小鼠Tubby样蛋白2(TULP2)多克隆抗体的制备与应用
文献摘要：
目的 制备兔抗小鼠Tubby(Tub)样蛋白2(TULP2)多克隆抗体并检测TULP2蛋白在小鼠睾丸中的表达情况.方法 分别将TULP2蛋白编码序列全长和TULP2蛋白含Tub结构域的羧基端(TULP2-C)插入pET-30a(+)质粒中,构建pET-30a(+)-TULP2和pET-30a(+)-TULP2-C原核表达重组质粒.将两种质粒分别转化人大肠杆菌E.coli BL21中,用异丙基-β--D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核蛋白表达.利用组氨酸(His)融合蛋白纯化柱纯化TULP2和TULP2-C原核蛋白,用梯度浓度的尿素复性.分别以复性后的TULP2和TULP2-C原核蛋白为抗原免疫成年雄性新西兰大白兔,获得两种类型的TULP2多克隆抗体.应用ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法及免疫荧光技术确定自制多克隆抗体的有效性及特异性.结果 成功构建了 pET-30a(+)-TULP2以及pET-30a(+)-TULP2-C重组质粒,并且通过IPTG诱导,表达出TULP2和TULP2-C原核重组蛋白.ELISA检测两种抗体滴度均达到1∶1 000 000.Western blot法、免疫荧光染色结果显示,利用TULP2-C原核蛋白为免疫原制备的抗体特异性较差.而利用TULP2全长蛋白为免疫原制备的多克隆抗体可以特异识别成年野生型小鼠睾丸中内源性的TULP2蛋白,而且可用于免疫荧光组织化学染色,结果显示TULP2在成年野生型小鼠的圆形精子细胞及其后变形期的精子细胞中表达.结论 应用TULP2全长蛋白为抗原可成功制备兔抗小鼠TULP2多克隆抗体,可同时用于Western blot法及免疫荧光组织化学染色.
文献关键词：
Tubby样蛋白2(TULP2);多克隆抗体;精子发生
中图分类号：
作者姓名：
徐文华;翁子睿;葛婷婷;陆雯婷;孟诗奇;牛长敏;郑英
作者机构：
扬州大学医学院妇产与生殖医学研究所,组织学与胚胎学教研室;江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室,江苏扬州225001
文献出处：
引用格式：
[1]徐文华;翁子睿;葛婷婷;陆雯婷;孟诗奇;牛长敏;郑英-.兔抗小鼠Tubby样蛋白2(TULP2)多克隆抗体的制备与应用)[J].细胞与分子免疫学杂志,2022(05):452-459
A类：
Tubby,TULP2,Tub
B类：
多克隆抗体,制备与应用,睾丸,蛋白编码,编码序列,全长,结构域,羧基端,pET,30a,原核表达,重组质粒,大肠杆菌,coli,BL21,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,核蛋白,组氨酸,His,融合蛋白,蛋白纯化,新西兰大白兔,效价,blot,免疫荧光技术,重组蛋白,抗体滴度,免疫荧光染色,染色结果,免疫原,抗体特异性,别成,野生型,内源性,组织化学染色,精子细胞,精子发生
AB值：
0.176478
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