典型文献
CK18基因的原核表达及蛋白纯化
文献摘要：
目的 采用原核表达和亲和层析的方法获得人细胞角蛋白18(CK18).方法 利用高保真聚合酶链式反应(PCR)法克隆人CK18基因的蛋白编码区,TA克隆入pMD18-T载体中;经筛选和鉴定后,将CK18基因编码区插入原核表达载体pGEX-4t-1中,构建重组质粒pGEX-CK18GST;将重组质粒导入感受态细菌Rosetta(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导CK18融合蛋白(GST-CK18)表达,并用GST亲和层析分离纯化CK18蛋白;用体外磷酸化、免疫组化等方法验证CK18磷酸化位点及其对细胞的影响.结果 成功克隆人CK18基因蛋白编码区,构建了原核表达质粒pGEX-CK18GST,表达了GST-CK18并获得纯化蛋白,体外磷酸化、免组织化学方法均证实CK18的52位丝氨酸磷酸化可以导致细胞骨架重排和细胞形态变化.结论 成功获得纯化的人CK18蛋白,为体外研究CK18和蛋白激酶之间的关系奠定了前期基础.
文献关键词：
细胞角蛋白18(CK18);聚合酶链式反应;基因克隆;原核表达;蛋白纯化;肝癌
中图分类号：
作者姓名：
倪佳;王伟;徐莹莹;陈相屹;张欣;孙达权
作者机构：
贵阳市妇幼保健院 &贵阳市儿童医院 儿童重症监护病房,贵州 贵阳 550001;贵州医科大学 基础医学院,贵州 贵阳 550025;宁波市第一医院 疝肝胆肛肠外科,浙江 宁波 315000
文献出处：
引用格式：
[1]倪佳;王伟;徐莹莹;陈相屹;张欣;孙达权-.CK18基因的原核表达及蛋白纯化)[J].贵州医科大学学报,2022(09):1025-1030
A类：
CK18GST
B类：
蛋白纯化,和亲,亲和层析,细胞角蛋白,高保真,聚合酶链式反应,克隆人,蛋白编码,编码区,TA,pMD18,基因编码,入原,原核表达载体,pGEX,4t,重组质粒,感受态,Rosetta,DE3,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,融合蛋白,层析分离,分离纯化,磷酸化,免疫组化,方法验证,组织化学,化学方法,丝氨酸,细胞骨架,重排,细胞形态,形态变化,体外研究,蛋白激酶,基因克隆,肝癌
AB值：
0.305305
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