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核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立
文献摘要：
目的:基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法.方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性.结果:蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg?L-1,纯度约为1.60.PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100％.在pH值7.0条件下,每100μL胶体金溶液加入3.3μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g?L-1,检测线浓度为1 g?L-1时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带.按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6μL,样品展开液100μL,检测10 min后可观察结果.核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10-3 mg?L-1仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10-1 mg?L-1出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致.结论:建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因.
文献关键词：
蜡样芽胞杆菌;entFM毒素;核酸试纸条;煮沸法;聚合酶链式反应
中图分类号：
作者姓名：
贾慧建;李昊宇;王丹;姜菲菲;赵潇颖;董婧瑶;孙丽媛
作者机构：
北华大学医学技术学院分子生物教研室,吉林 吉林132013;山东省聊城市人民医院检验科,山东 聊城 252000;中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所,吉林 吉林132001
文献出处：
引用格式：
[1]贾慧建;李昊宇;王丹;姜菲菲;赵潇颖;董婧瑶;孙丽媛-.核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(05):1333-1340
A类：
entFM
B类：
核酸试纸条,快速检测,蜡样芽胞杆菌,毒素基因,煮沸法,靶基因,NCBI,primer,BLAST,软件设计,特异性引物,条带,GenBank,已登记,胶体金,质控,检测线,纤维素膜,装成,成核,电泳,金黄色葡萄球菌,铜绿,假单,大肠埃希菌,沙门氏菌,交叉反应,阴性结果,稳定性检测,灵敏度高,快速鉴别,聚合酶链式反应
AB值：
0.157191
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