典型文献
细菌外膜蛋白BamA突变体构建及位点运动性分析
文献摘要：
目的 构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性.方法 利用重叠延伸PCR(SOE?PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C)突变为丝氨酸(S),将POTRA结构域上第313位氨基酸由甘氨酸(G)突为C,构建含BamA?C690S?C700S?G313C突变的原核表达载体pET22b?Strep?BamA.异丙基?β?D?硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导突变蛋白表达后,利用Strep?Tactin Sepharose柱亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化.甲烷硫代磺酸(MTSL)标记所得纯化蛋白的半胱氨酸后,进行电子顺磁共振(EPR)波谱检测,通过EPR波谱拟合获得旋转相关时间τc,分析G313C氨基酸位点的运动特性.结果 构建了BamA?C690S?C700S?G313C突变体原核表达载体,实现了突变体蛋白有效表达和纯化.G313C位点EPR波谱为单成分运动状态波谱,其τc值为(2.30±0.03)ns.结论 该研究建立了BamA点突变原核表达和蛋白纯化方法,并获得BamA蛋白G313C运动性特征参数,为进一步研究BamA蛋白在外膜蛋白整合过程中的结构机制提供了数据.
文献关键词：
细菌外膜蛋白质类;BamA;突变;定点自旋标记-电子顺磁共振;运动性
中图分类号：
作者姓名：
王媛;李志慧;魏倩;董国福;储引娣;王长振
作者机构：
军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系,医学分子生物学国家重点实验室,北京 100005
文献出处：
引用格式：
[1]王媛;李志慧;魏倩;董国福;储引娣;王长振-.细菌外膜蛋白BamA突变体构建及位点运动性分析)[J].军事医学,2022(09):677-681
A类：
BamA,POTRA,G313,C690S,C700S,G313C,Tactin,MTSL,波谱拟合,细菌外膜蛋白质类
B类：
突变体,运动性,桶状,蛋白组,组装机,BAM,原核表达载体,定位点,位点突变,蛋白多肽,易位,位相,结构域,运动特性,SOE,丝氨酸,甘氨酸,pET22b,Strep,异丙基,吡喃,半乳糖,糖苷,IPTG,突变蛋白,Sepharose,亲和层析,电子顺磁共振,EPR,氨基酸位点,有效表达,分运,运动状态,ns,蛋白纯化,纯化方法,自旋
AB值：
0.223945
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
