典型文献
结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64单克隆抗体的制备及其特异性
文献摘要：
目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal anti-body,mAb),并分析mAb的特异性.方法 PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白.重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系.以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb.ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性.结果 本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了 MPT64蛋白.亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白.该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2.中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb.该mAb的亲和力为2.813×10-7 g/mL,属于IgG 1亚类.MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白.结论 本研究制备了 MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础.
文献关键词：
结核分枝杆菌;MPT64;分泌蛋白;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
谢燕玲;宁唤唤;梁璇;康健;任瑞;张慧;张娜娜;路延之;柏银兰
作者机构：
延安大学生命科学学院,延安 716000;空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,西安 710032;西安培华学院医学院,西安 710065
文献出处：
引用格式：
[1]谢燕玲;宁唤唤;梁璇;康健;任瑞;张慧;张娜娜;路延之;柏银兰-.结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64单克隆抗体的制备及其特异性)[J].中国人兽共患病学报,2022(05):387-393
A类：
mpt64,A5B2
B类：
结核分枝杆菌,分泌蛋白,MPT64,单克隆抗体的制备,Mycobacterium,tuberculosis,Mtb,Monoclonal,anti,body,mAb,pET28a,原核表达载体,重组菌株,IPTG,诱导表达,blot,亲和层析,层析法,目的蛋白,脾细胞,杂交瘤细胞,SP2,选得,细胞系,腹水,中压,液相色谱仪,亲和力,亚类,重组蛋白,细胞融合,IgG,特异性识别,结核病诊断,诊断和治疗
AB值：
0.211364
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