典型文献
蜱传脑炎病毒非结构蛋白1的原核表达、纯化及应用
文献摘要：
目的 原核表达、纯化蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1),并评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)临床诊断中的应用价值.方法 根据GenBank登录的TBEV"森张"株NS1基因序列设计引物,PCR扩增TBEV NS1基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经GST bestarose 4FF亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性;以重组NS 1蛋白为固相抗原,采用间接ELISA法检测临床血清.结果 重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量为22.1％,主要以包涵体形式存在;纯化蛋白纯度达93％以上,与TBEV全病毒感染小鼠血清具有良好的反应原性.采用NS1作为包被抗原的间接ELISA法检测临床血清,特异性为95％,敏感度为100％.结论 成功在大肠埃希菌中表达并纯化了 TBEV NS1蛋白;作为病毒特异性抗原,经间接ELISA法验证,该蛋白在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值.
文献关键词：
蜱传脑炎病毒;流行性乙型脑炎病毒;非结构蛋白1;原核表达;酶联免疫吸附测定
中图分类号：
作者姓名：
张婷婷;王伟;陈子杨;李景良;张颖;孙宏亮;常军亮
作者机构：
长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130012;黑龙江红十字(森工总)医院急诊科,黑龙江哈尔滨150040
文献出处：
引用格式：
[1]张婷婷;王伟;陈子杨;李景良;张颖;孙宏亮;常军亮-.蜱传脑炎病毒非结构蛋白1的原核表达、纯化及应用)[J].中国生物制品学杂志,2022(11):1351-1356
A类：
TBE,bestarose
B类：
蜱传脑炎病毒,非结构蛋白,tick,borne,encephalitis,virus,TBEV,structural,protein,NS1,GenBank,登录,基因序列,序列设计,引物,原核表达载体,pGEX,4T,重组表达,质粒,大肠埃希菌,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,重组蛋白,GST,4FF,亲和层析,层析纯化,blot,反应原性,双酶,白相,相对分子质量,包涵体,蛋白纯度,小鼠血清,包被抗原,临床疾病,血清学诊断,流行性乙型脑炎病毒,酶联免疫吸附测定
AB值：
0.298388
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