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人乳头瘤病毒6型L1蛋白的原核表达及免疫原性评价
文献摘要：
目的 确定原核表达系统中人类乳头瘤病毒6型(human papillomavirus 6,HPV6)L1蛋白的最佳表达条件,并对HPV6 L1 VLP免疫小鼠后产生的中和抗体水平进行评价.方法 将密码子优化的HPV6 L1基因片段与原核表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒pET30a-6L1,在大肠埃希菌中表达HPV6 L1蛋白,并通过添加分子伴侣(TF、GroES-GroEL、DnaK-DnaJ-GrpE)筛选能够增加目的蛋白表达的最佳条件.将表达的HPV6 L1蛋白经密度梯度离心、阳离子交换层析后获得纯化蛋白,对其形态进行表征.将纯化的HPV6 L1 VLP免疫BALB/c小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠血清中和抗体水平.结果 质粒pET30a-6L1经双酶切鉴定证明构建正确;添加TF分子伴侣时HPV6 L1蛋白表达量最高;HPV6 L1 VLP是呈均一的、直径45～65 nm的球状结构,与HPV6天然病毒颗粒的形态、大小相似;HPV6 L1 VLP初次免疫小鼠第8周,血清抗体水平达到峰值,为105以上.结论 分子伴侣TF促进了 HPV6 L1蛋白的可溶性表达,纯化后的目的蛋白免疫原性良好.本研究为后续各型别HPV L1蛋白表达工艺的探索提供了思路,也为下一步的中试扩大培养奠定了基础.
文献关键词：
人乳头瘤病毒6型;L1蛋白;大肠埃希菌;原核表达;分子伴侣;中和抗体
中图分类号：
作者姓名：
贺蕾;包小华;李相梅;周晶莹;褚彦飞;孙博;谷铁军
作者机构：
吉林大学生命科学学院,吉林长春130012;吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室,吉林长春130012;中国人民解放军联勤保障部队第964医院消化内科,吉林长春130000;上海瑞宙生物科技有限公司,吉林长春130012
文献出处：
引用格式：
[1]贺蕾;包小华;李相梅;周晶莹;褚彦飞;孙博;谷铁军-.人乳头瘤病毒6型L1蛋白的原核表达及免疫原性评价)[J].中国生物制品学杂志,2022(08):949-953,959
A类：
6L1,GroES,DnaK,GrpE
B类：
人乳头瘤病毒,免疫原性,表达系统,人类乳头瘤病毒,human,papillomavirus,HPV6,VLP,中和抗体,密码子优化,原核表达载体,pET30a,重组表达,质粒,大肠埃希菌,加分,分子伴侣,TF,GroEL,DnaJ,目的蛋白,最佳条件,经密,密度梯度,阳离子交换,离子交换层析,BALB,假病毒中和试验,试验检测,小鼠血清,双酶,均一,球状,病毒颗,血清抗体水平,可溶性表达,各型,型别,中试,扩大培养
AB值：
0.276442
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