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大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基的原核表达及其多克隆抗体的制备
文献摘要：
目的 原核表达大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并制备其多克隆抗体.方法 利用PCR技术扩增LTB基因,并将其连接至pET30a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8 x His,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对目的蛋白表达条件进行优化.利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,免疫大耳白家兔制备兔源抗LTB多克隆抗体.结果 重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组LTB蛋白相对分子质量约为13 000,以包涵体形式表达,最佳诱导条件为:用0.4 mmol/L IPTG于30℃诱导4 h;纯化后蛋白浓度为3.7 mg/mL;制备的多克隆抗体可用于LTB的Western blot及IFA检测.结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了重组LTB蛋白,并制备了具有良好反应原性和特异性的多克隆抗体,为产肠毒素型大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)疾病的诊断及LTB黏膜免疫佐剂特性的研究奠定了基础.
文献关键词：
大肠埃希菌;不耐热肠毒素B亚基;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
龚志远;张梦瑶;金宏丽;黄培;张海丽;李媛媛;王化磊
作者机构：
吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室,吉林长春130062
文献出处：
引用格式：
[1]龚志远;张梦瑶;金宏丽;黄培;张海丽;李媛媛;王化磊-.大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基的原核表达及其多克隆抗体的制备)[J].中国生物制品学杂志,2022(04):407-412,417
A类：
B类：
大肠埃希菌,不耐,耐热,热肠,肠毒素,亚基,多克隆抗体,heat,labile,enterotoxin,subunit,LTB,pET30a,原核表达载体,质粒,His,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,目的蛋白,亲和层析,层析法,白家,家兔,兔源,双酶,白相,相对分子质量,包涵体,诱导条件,蛋白浓度,blot,IFA,表达系统,反应原性,enterotoxigenic,Escherichia,coli,ETEC,黏膜免疫,免疫佐剂
AB值：
0.324746
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