目的 建立一种猪链球菌的快速、简便检测方法.方法 根据猪链球菌2型强毒株05ZYH33组氨酸三联体蛋白HtpsC蛋白基因序列设计特异性引物,将HtpsC蛋白基因克隆至原核表达载体pET-30a并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经0.2 mmol/LIPTG、15℃条件下诱导表达HtpsC蛋白.经Ni-IDA纯化后免疫新西兰白兔获得抗血清,通过亲和层析纯化制备Anti-HtpsC多克隆抗体.在此基础上,建立检测猪链球菌的斑点酶联免疫吸附检验法(Dot-ELISA),进一步优化了检测条件,并对该方法的特异性和敏感性进行评价.结果 通过原核表达成功制备了 HtpsC蛋白.Western blot结果显示,制备的Anti-HtpsC多克隆抗体可特异性结合HtpsC蛋白.优化的最佳多抗使用浓度为2.5 μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为1 ∶ 3 000.特异性试验结果表明,含HtpsC蛋白基因的多种血清型猪链球菌均可呈现清晰的黄褐色斑点,但不含该蛋白基因的9型猪链球菌除外.而其他对照菌株:大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、化脓性链球菌、无乳链球菌和粪肠球菌均无斑点出现.灵敏度试验结果表明,该方法的检测限为1×106 CFU/mL.结论 本研究建立的Dot-ELISA方法特异性强,灵敏度良好,可用于检测多种血清型猪链球菌.

猪链球菌;HtpsC蛋白;Dot-ELISA

南京工业大学食品与轻工学院,南京210035;东部战区疾病预防与控制中心,南京210002

[1]蔡旭燊;燕书豪;赵芷若;郑峰;胡丹;卢亚维;申雪娇;何铠;熊晓辉;操敏;卢一辰-.猪链球菌组氨酸三联体蛋白多抗的制备及Dot-ELISA检测方法的建立)[J].中国人兽共患病学报,2022(08):657-665

05ZYH33,HtpsC

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