典型文献
猫ω干扰素和γ干扰素的可溶性原核表达及纯化
文献摘要：
旨在克隆到猫ω干扰素和γ干扰素(FeIFN-ω和FeIFN-γ)基因的基础上,分析它们的一些生物学特性,并进行可溶性原核表达和简化纯化工艺,为后期作为抗病毒药物的开发奠定基础.根据GenBank登录的FeIFN-ω和FeIFN-γ基因序列,对其编码氨基酸的信号肽序列进行分析,设计引物用于克隆不包含信号肽的成熟蛋白基因序列,分别插入到原核表达载体pET28a-SUMO,转化入BL21感受态细胞进行表达,并通过不同的诱导时间、温度和控制IPTG浓度优化其表达条件,在纯化阶段摸索简易工艺.结果表明,FeIFN-ω基因编码区长591 bp,共编码196个氨基酸,信号肽序列为前23位氨基酸;FeIFN-γ基因编码区长504 bp,共编码167个氨基酸,信号肽序列为前20位氨基酸.将克隆到的FeIFN-ω和FeIFN-γ基因通过 BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点带入到含SUMO标签的原核表达载体,构建成功的重组质粒分别命名为pET28a-SUMO-FeIFN-ω 和 pET28a-SUMO-FeIFN-γ.优化条件后表明 SUMO-FeIFN-ω 融合蛋白在IPTG终浓度为0.6 mmol/L时,16℃诱导6h表达量最高;SUMO-FeIFN-γ融合蛋白在IPTG终浓度为0.8 mmol/L时,16℃诱导9 h表达量最高.最终表达出均以可溶性形式存在的两种融合蛋白,经镍柱纯化,用SUMO蛋白酶去除标签和经两次截留柱纯化获得不含标签的干扰素,分子质量约18 ku和17 ku,与预期大小相符,表明FeIFN-ω和FeIFN-γ蛋白成功得到表达和纯化.
文献关键词：
猫ω干扰素;猫γ干扰素;可溶性表达;蛋白纯化
中图分类号：
作者姓名：
任丽君;杨孝朴;包世俊;武小椿;马永华;魏衍全
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070
文献出处：
引用格式：
[1]任丽君;杨孝朴;包世俊;武小椿;马永华;魏衍全-.猫ω干扰素和γ干扰素的可溶性原核表达及纯化)[J].动物医学进展,2022(01):38-45
A类：
FeIFN
B类：
干扰素,生物学特性,纯化工艺,抗病毒药物,GenBank,登录,基因序列,信号肽,肽序列,引物,原核表达载体,pET28a,SUMO,化入,BL21,感受态,诱导时间,IPTG,基因编码,编码区,区长,bp,BamH,Hind,酶切位点,带入,重组质粒,优化条件,融合蛋白,6h,截留,分子质量,ku,可溶性表达,蛋白纯化
AB值：
0.23945
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
