典型文献
锡兰钩虫SLP-1基因的克隆表达与免疫学特性分析
文献摘要：
为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据Ace-SLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码基因序列(Ace-XL-SLP-1)克隆至原核表达载体pET-28a中,构建的重组质粒鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示重组Ace-XL-SLP-1蛋白(rAce-XL-SLP-1)以包涵体形式表达,分子质量为14.4 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可以分别被鼠His标签MAb及锡兰钩虫感染犬的阳性血清所识别,具有较好的反应原性.将rAce-XL-SLP-1分别以0～40 μg/mL体外刺激健康犬的外周血淋巴细胞(PBMC),采用CCK-8试剂盒检测其对PBMC增殖的影响,结果显示,与对照组相比,20 μg/mL与40 μg/mL的rA4ce-XL-SLP-1均可显著刺激犬PBMC的增殖(P＜0.05),表明该重组蛋白能够诱导宿主细胞产生免疫应答反应,免疫原性较好.本研究首次克隆表达了锡兰钩虫成虫Ace-XL-SLP-1基因,并对其免疫学特性做了初步研究,为锡兰钩虫血清学诊断方法的建立和疫苗的研制提供参考数据.
文献关键词：
锡兰钩虫;鞘脂激活蛋白样蛋白;原核表达;免疫学特性
中图分类号：
作者姓名：
何龙;赵琪;庄婷婷;朱诗兰;陈晓雨;李国清
作者机构：
华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642
文献出处：
引用格式：
[1]何龙;赵琪;庄婷婷;朱诗兰;陈晓雨;李国清-.锡兰钩虫SLP-1基因的克隆表达与免疫学特性分析)[J].中国预防兽医学报,2022(01):80-85
A类：
锡兰钩虫,鞘脂激活蛋白样蛋白,DQ855414,315bp,rAce,rA4ce
B类：
SLP,克隆表达,免疫学特性,成虫,cDNA,GenBank,基因序列,特异性引物,ORF,全长,编码蛋白,氨基酸序列,生物信息学分析,疏水蛋白,信号肽,肽序列,跨膜结构域,基因编码,序列信息,编码基因,XL,原核表达载体,pET,28a,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,诱导表达,SDS,PAGE,包涵体,分子质量,ku,blot,重组蛋白,His,MAb,阳性血清,反应原性,激健,外周血淋巴细胞,PBMC,CCK,试剂盒,宿主,主细胞,免疫应答,应答反应,免疫原性,血清学诊断
AB值：
0.250569
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