[目的]表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmoniella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考.[方法]根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254388)设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性.将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达.应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况.将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成.应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性.[结果]肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸.限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功.SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白.重组菌在15℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40％.生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16-301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71％、39.40％和16.89％;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5-40、51-68、80-92、94、101-109、146-157、160-168、199-231和236-298位氨基酸处.[结论]试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位.本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考.

肠炎沙门菌;avrA蛋白;原核表达;生物信息学分析

徐云明;卜永谦;卞蓉蓉;杨剑波;孙智远;陈益;柳增善;任洪林

江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院,句容212400;句容市农业农村局,句容212400;吉林大学人兽共患病研究所教育部重点实验室,长春130062

中国畜牧兽医

[1]徐云明;卜永谦;卞蓉蓉;杨剑波;孙智远;陈益;柳增善;任洪林-.肠炎沙门菌avrA蛋白的原核表达及其生物信息学分析)[J].中国畜牧兽医,2022(11):4168-4177

Salmoniella,Translate,YopJ

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