典型文献
猪链球菌3种毒力因子多细胞表位靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ的构建及安全性检测
文献摘要：
为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了 SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ.经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白.由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达.表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL.利用不同浓度纯化重组蛋白对2％猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性.体外溶血试验结果显示在5 μg/mL～500 μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2％猪红细胞悬液溶血率低于5％;细胞毒性试验结果显示经500 μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5％和99.6％,与对照组RGR相比均无显著差异.表明,重组蛋白无明显毒性作用.本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础.
文献关键词：
猪链球菌;亚单位疫苗;重组蛋白;体外溶血试验;细胞毒性
中图分类号：
作者姓名：
于恩远;潘晨浩;姜轩;李颖;赵瑞利;张欣;曾君;荣睿璠;金天明;于晓雪
作者机构：
天津农学院动物科学与动物医学学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300392;天津市动物疫病预防控制中心,天津 300402
文献出处：
引用格式：
[1]于恩远;潘晨浩;姜轩;李颖;赵瑞利;张欣;曾君;荣睿璠;金天明;于晓雪-.猪链球菌3种毒力因子多细胞表位靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ的构建及安全性检测)[J].中国预防兽医学报,2022(04):416-422
A类：
DC3pep,SsnA,DLDH,ZnuA,44ku,DC3pepSDZ
B类：
猪链球菌,毒力因子,多细胞,细胞表位,重组蛋白,安全性检测,SS,重组亚单位疫苗,生物信息学软件,核酸酶,硫辛,胺脱氢酶,锌转运蛋白,Th,抗原表位,亲疏水性,抗原性,二级结构,亲水性,树突状细胞,细胞靶向,靶向肽,氨基酸序列,理化分析,分子质量,等电点,pI,原核表达载体,pET28a,化感,感受态,IPTG,诱导表达,western,blot,达产,亲和层析,SDS,PAGE,目的蛋白,BCA,蛋白浓度,试剂盒,猪红细胞,红细胞悬液,体外溶血试验,PK15,IPEC,J2,生物安全性,溶血率,细胞毒性试验,孵育,增殖率,RGR,毒性作用,免疫保护效果
AB值：
0.266643
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