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EV-A71病毒3D聚合酶突变体的可溶性高效表达纯化及热稳定性分析
文献摘要：
RNA依赖的RNA聚合酶是EV-A71病毒进行药物设计的药物靶点蛋白之一,本研究通过已知小核糖核酸病毒科聚合酶同源结构的序列比对,设计了三个针对EV-A71 3D聚合酶,有助于提高核苷酸类似物药物结合效率的突变体,以实验室原有野生型EV-A71 3D聚合酶质粒为模板,通过PCR扩增、野生型质粒的消化分解及转化的方式,构建突变体质粒的阳性克隆,并转化入大肠杆菌3016感受态细胞,通过低温过夜诱导,超声破碎富集的菌泥,将上清经过Ni柱亲和纯化、High trap Q离子交换层析纯化及Superdex 200 10/300凝胶过滤层析三个步骤的梯度纯化,获得了高纯度高产量的EV-A71 3D聚合酶突变体重组蛋白,并通过荧光定量的方法,采用荧光定量PCR仪对最终获得的稳定表达突变体重组蛋白,进行不同溶液条件的荧光热稳定性分析,得到了该重组蛋白最佳的蛋白溶解条件.为深入研究设计以EV-A71 3D作为药物靶点进行核苷酸类似物药物设计提供了技术基础.
文献关键词：
EV-A71病毒;3D聚合酶;药物靶点;荧光定量;热稳定性分析
中图分类号：
作者姓名：
秦博;赵蓉;崔胜
作者机构：
中国医学科学院病原生物学研究所,北京100176
文献出处：
引用格式：
[1]秦博;赵蓉;崔胜-.EV-A71病毒3D聚合酶突变体的可溶性高效表达纯化及热稳定性分析)[J].病毒学报,2022(03):600-612
A类：
B类：
EV,A71,突变体,高效表达,表达纯化,热稳定性分析,药物设计,药物靶点,靶点蛋白,白之,小核糖核酸病毒,病毒科,序列比对,高核,核苷酸类似物,野生型,质粒,化入,大肠杆菌,感受态,过夜,超声破碎,上清经,亲和纯化,High,trap,离子交换层析,层析纯化,Superdex,凝胶过滤层析,高纯度,高产量,重组蛋白,稳定表达,荧光热稳定性,溶解条件,技术基础
AB值：
0.29904
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