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人腺病毒7型DNA结合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
文献摘要：
目的:原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法:合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果:成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论:成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。
文献关键词：
人腺病毒7型;DNA结合蛋白;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
朱云;张林琳;段亚丽;谢正德
作者机构：
国家儿童医学中心 国家呼吸系统临床医学研究中心 首都医科大学附属北京儿童医院 儿科重大疾病研究教育部重点实验室 中国医学科学院儿童危重感染诊治创新单元 儿童呼吸道感染性疾病研究北京市重点实验室 北京市儿科研究所感染与病毒研究室，北京 100045;国家儿童医学中心 首都医科大学附属北京儿童医院感染与病毒研究室，北京 100045
文献出处：
引用格式：
[1]朱云;张林琳;段亚丽;谢正德-.人腺病毒7型DNA结合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备)[J].中华预防医学杂志,2022(02):171-177
A类：
rDBP
B类：
人腺病毒,结合蛋白,多克隆抗体制备,达人,HAdV,pET30a,大肠杆菌,BL21,DE3,感受态,IPTG,导进,镍离子,子金,金属螯合,层析纯化,家兔,间接酶联免疫吸附试验,抗体效价,blotting,间接免疫荧光,IFA,检测抗体,抗体特异性,包被,急性期,IgM,IgG,原核表达载体,亲和层析,多克隆抗血清,法显,重组蛋白
AB值：
0.25558
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