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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其在该病毒检测中的应用
文献摘要：
为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的单克隆抗体(MAb),并应用于BVDV检测中,本研究采用蔗糖密度梯度离心法纯化BVDV ZD-2018株,以纯化的该BVDV全病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆、有限稀释法进行5次克隆纯化,获得6株稳定分泌抗BVDV的杂交瘤细胞株,分别 命名为 6D2F2、4H6A6、1D8C7、IG8D8、1C7E7 和 3A8E1,其中 6D2F2、1G8D8、1C7E7 和3A8E1属于IgG2a亚类,4H6A6属于IgG1亚类,1D8C7属于IgG2b亚类.采用间接ELISA方法评价了 6株MAb的特异性,结果显示,6株MAb与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型均无交叉反应.间接免疫荧光试验结果显示,所制备的6株MAb均能够与BVDV反应;利用原核表达的BVDV结构蛋白C、E0、E1和E2对获得的MAb进行western blot鉴定,结果显示,MAb 6D2F2、4H6A6、1D8C7和1G8D8均能够特异性识别BVDVE2蛋白,MAb 1C7E7和3A8E1均能够特异性识别 BVDV EO蛋白.进一步基于MAb4H6A6制备了小鼠腹水(效价为1∶106),经抗体纯化和辣根过氧化物酶标记后建立免疫组化方法,用于检测人工感染BVDV的犊牛肠道组织中的病毒,结果显示,利用本实验制备的Mab初步建立的免疫组化方法可定性检测组织中的BVDV.本研究制备的BVDV Mab为BVDV快速检测方法的建立及其病原学研究奠定了物质基础.
文献关键词：
牛病毒性腹泻病毒;结构蛋白;单克隆抗体;免疫组化法
中图分类号：
作者姓名：
王以欣;姜晓霞;孙晓波;韩美婧;张晓梅;乔薪瑗;贾烁;徐义刚
作者机构：
东北农业大学动物医学学院,黑龙江 哈尔滨 150030;浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江农林大学动物科技学院动物医学院,浙江 杭州 311300
文献出处：
引用格式：
[1]王以欣;姜晓霞;孙晓波;韩美婧;张晓梅;乔薪瑗;贾烁;徐义刚-.牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其在该病毒检测中的应用)[J].中国预防兽医学报,2022(06):624-629
A类：
6D2F2,4H6A6,1D8C7,IG8D8,1C7E7,3A8E1,1G8D8,BVDVE2,MAb4H6A6,Mab
B类：
牛病毒性腹泻病毒,单克隆抗体的制备,病毒检测,蔗糖,密度梯度离心法,ZD,BALB,脾细胞,SP2,细胞融合,有限稀释,稀释法,杂交瘤细胞株,IgG2a,亚类,IgG1,IgG2b,方法评价,猪瘟病毒,牛传染性鼻气管炎病毒,牛细小病毒,牛轮状病毒,牛呼吸道合胞体病毒,和牛,牛副流感,副流感病毒,交叉反应,间接免疫荧光试验,原核表达,结构蛋白,E0,western,blot,特异性识别,EO,腹水,效价,辣根过氧化物酶,人工感染,犊牛,牛肠道,肠道组织,实验制备,定性检测,快速检测方法,病原学研究,免疫组化法
AB值：
0.228023
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