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产肠毒素大肠杆菌F17菌毛黏附亚基单克隆抗体的制备及其抗原表位分析
文献摘要：
为获得产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F17菌毛黏附亚基G的单克隆抗体(MAb)及其抗原表位信息,本研究通过原核表达系统表达了重组F17-G蛋白(rF17-G-His)并纯化,SDS-PAGE和western blot检测结果显示表达的rF17-G-His大小为53 ku,纯化后条带单一.利用该重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了F17-G的MAb并制备腹水,采用间接ELISA、SDS-PAGE、western blot、抗体亚类鉴定试剂盒对所获得的MAb进行鉴定.结果显示,获得了3株可稳定分泌MAb的阳性杂交瘤细胞株F2G、C3G、E5G.3株MAb亚类均为IgG1,轻链为κ链,其中MAb F2G效价最高,上清效价为1:2048,腹水效价为1:1000000.3株MAb均不与其他菌毛反应,具有较强的特异性.其中MAb E5G可以有效抑制ETEC DN1502株黏附肠上皮细胞.对MAb识别的抗原表位鉴定和分析结果显示,MAb F2G识别的抗原表位区域是aa1～aa15:1AAVSFIGSTENDVGP15,MAb C3G识别的表位区域是aa211～aa225:211GTTSLKLQCDAGVTV225,二者均为线性表位.MAb E5G识别的是构象表位,且位于凝集素结构域第89位天冬氨酸.采用软件分析F17-G生物学特性,结果显示,F17-G是稳定的亲水性蛋白,aa1～aa15是较活跃的表位区域,aa1～aa15、aa211～aa225在变体F17-G1、F17-G2中较为保守,aa89在3个变体中均高度保守.综合分析后认为MAb E5G具有预防和治疗携带F17菌毛ETEC引发的疾病的潜力.本研究为相应疾病的新型药物、诊断方法和疫苗的研发提供了有效生物制剂和可靠的生物学信息.
文献关键词：
产肠毒素大肠杆菌;F17菌毛;G亚基;单克隆抗体;抗原表位
中图分类号：
作者姓名：
刘嘉利;侯美佳;赵佳慧;董秀梅;杨巍;张萍;师东方
作者机构：
东北农业大学动物医学学院,黑龙江 哈尔滨 150030;农业农村部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站,黑龙江 哈尔滨 150030
文献出处：
引用格式：
[1]刘嘉利;侯美佳;赵佳慧;董秀梅;杨巍;张萍;师东方-.产肠毒素大肠杆菌F17菌毛黏附亚基单克隆抗体的制备及其抗原表位分析)[J].中国预防兽医学报,2022(11):1208-1215
A类：
rF17,F2G,E5G,DN1502,aa1,aa15,1AAVSFIGSTENDVGP15,aa211,aa225,211GTTSLKLQCDAGVTV225,aa89
B类：
产肠毒素大肠杆菌,菌毛,亚基,单克隆抗体的制备,ETEC,MAb,原核表达,表达系统,His,SDS,PAGE,western,blot,ku,条带,重组蛋白,BALB,杂交瘤技术,技术获得,腹水,亚类,试剂盒,杂交瘤细胞株,C3G,IgG1,轻链,效价,上清,水效,肠上皮细胞,抗原表位鉴定,线性表位,构象表位,凝集素,结构域,天冬氨酸,生物学特性,亲水性,变体,G2,预防和治疗,新型药物,生物制剂
AB值：
0.187729
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